[發(fā)明專利]一種高品質(zhì)肝素鈉的純化方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010598542.9
• 申請日: 2020-06-28
• 公開（公告）號: CN111560087A
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 方秋華;魏海濤;魏軍;王海立;張炳順;劉初亮;劉鑠佳;劉佳華;劉琴發(fā)
• 申請（專利權(quán)）人: 揭陽市潤達(dá)腸衣有限公司;廣東百試特生物技術(shù)研究院有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 孫鳳俠

本發(fā)明屬于肝素鈉生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高品質(zhì)肝素鈉的純化方法。該方法依次采用超聲酶解、膜分離、氧化、醇沉等步驟對粗品肝素鈉進行純化，可以除掉粗品肝素鈉中的蛋白質(zhì)、核酸等雜質(zhì)，無雜質(zhì)增加，還能使肝素鈉保持較高的活性，所得肝素鈉具有較高的品質(zhì)和效價；且該方法操作簡單，回收率高，非常適用于大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，具有較好的經(jīng)濟和社會效益。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于肝素鈉生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及一種高品質(zhì)肝素鈉的純化方法。

背景技術(shù)

肝素是廣泛存在于一些哺乳動物臟器中的硫酸氨基葡聚糖，屬糖胺聚糖類產(chǎn)品，與金屬離子結(jié)合成鹽應(yīng)用。肝素的發(fā)現(xiàn)已有百年歷史，其作為抗凝藥物應(yīng)用于臨床也已有70余年，是預(yù)防手術(shù)后血栓形成和治療急性靜脈血栓的首選藥物。并且，肝素或其衍生物還具有調(diào)血脂、抗炎、抗過敏及免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)功能，因此，到目前為止還沒有一種產(chǎn)品能夠完全替代肝素的臨床作用，肝素仍然是當(dāng)今最重要的抗凝藥物之一。

目前臨床上使用的肝素主要來源于豬小腸黏膜、豬肺或牛肺。常用的肝素鈉提取方法是離子交換樹脂法，將豬小腸經(jīng)粉碎、鹽解酶解、樹脂吸附、洗滌脫附、醇沉烘干等步驟后得到粗品肝素鈉。但是由于肝素鈉解離不完全使得粗品肝素鈉中仍殘留有一定數(shù)量的蛋白質(zhì)，需進一步精制才可用于臨床。肝素鈉的精制過程主要是對粗品肝素鈉進行除雜和脫色。目前，我國肝素鈉的精制多采用高錳酸鉀氧化法或過氧化氯兩步氧化法。如中國專利申請CN1844165A公開了一種粗品肝素鈉分離純化為高純度肝素鈉的方法，該方法包括離子交換層析、高錳酸鉀氧化、超濾和有機分級沉淀步驟，但是得到的產(chǎn)品存在活性損失大、色澤差，生成二氧化錳較難去除等問題，且二氧化錳對肝素鈉有部分吸附作用，使產(chǎn)品回收率較低；中國專利申請CN103804527A公開了一種粗品肝素鈉精制新工藝，該工藝包括酶解、兩步過氧化氫氧化步驟，但是得到的肝素鈉效價較低，其原因可能是二次氧化對肝素鈉結(jié)構(gòu)造成了破壞。因此，迫切需要提供一種高品質(zhì)肝素鈉的純化方法，顯著去除肝素鈉粗品中蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)菌內(nèi)毒素等雜質(zhì)，提高肝素鈉產(chǎn)品的回收率和效價，提高經(jīng)濟效益。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有肝素鈉純化技術(shù)所得肝素鈉回收率、效價低等的缺陷和不足，提供一種高品質(zhì)肝素鈉的純化方法，顯著去除肝素鈉粗品中蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)菌內(nèi)毒素等雜質(zhì)，提高肝素鈉產(chǎn)品的回收率和效價，提高經(jīng)濟效益。

本發(fā)明的目的是提供一種高品質(zhì)肝素鈉的純化方法。

本發(fā)明上述目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種高品質(zhì)肝素鈉的純化方法，包括以下步驟：

S1、酶解：將粗品肝素鈉加入水中溶解，調(diào)節(jié)pH為7.5～8.0，加入復(fù)合酶，常溫下超聲酶解，得酶解液；

S2、膜分離：將步驟S1所得酶解液用高分子膜材料進行膜分離，當(dāng)溶液體積占步驟S1所得酶解液總體積的15～20％時，停止抽濾，得截留液；

S3、氧化：調(diào)節(jié)步驟S2所得截留液pH為10.0～11.0，加入過氧化氫溶液，常溫下氧化反應(yīng)，過濾分離，得濾液；

S4、醇沉：調(diào)節(jié)步驟S3所得濾液pH為7.0～8.0，加入飽和食鹽水?dāng)嚢柚脸吻澹偌尤霝V液體積1.5～2.0倍量的95％乙醇溶液，攪拌均勻，沉淀、過濾、干燥，即得；

其中，步驟S1所述復(fù)合酶由堿性蛋白酶、胰蛋白酶和核酸酶組成。

進一步地，步驟S1中，所述復(fù)合酶由堿性蛋白酶、胰蛋白酶和核酸酶按重量比10：(3～6)：(0.4～0.6)組成。

更進一步地，步驟S1中，所述復(fù)合酶的添加量為粗品肝素鈉重量的 0.05～0.4％。

進一步地，步驟S1中，所述超聲的功率為150～200W。

更進一步地，步驟S1中，所述酶解的時間為3～4h。