[發(fā)明專利]一種針對(duì)神經(jīng)肌肉病生物醫(yī)藥的監(jiān)測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010595922.7
• 申請(qǐng)日: 2020-06-27
• 公開（公告）號(hào): CN111676284A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張銀冰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 張銀冰
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6869
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• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其為一種針對(duì)神經(jīng)肌肉病生物醫(yī)藥的監(jiān)測(cè)方法，包括以下步驟：A、提取基因組DNA；B、制備捕獲文庫(kù)；C、高通量測(cè)序：上機(jī)測(cè)序，數(shù)據(jù)分析得到致病位點(diǎn)相關(guān)信息，再使用不同引物序列進(jìn)行前后兩次PCR擴(kuò)增，從而產(chǎn)生更多不同標(biāo)簽的引物；D、分析總結(jié)：通過對(duì)所得測(cè)序數(shù)據(jù)與人類基因組的參考序列進(jìn)行對(duì)比，并對(duì)所測(cè)基因的每個(gè)突變位點(diǎn)情況進(jìn)行分析，得到神經(jīng)肌肉病相關(guān)基因突變位點(diǎn)，并總結(jié)所用生物靶向醫(yī)藥中有效成分的作用機(jī)理、指標(biāo)數(shù)據(jù)；E、橫向比對(duì)；本發(fā)明不僅提高了針對(duì)神經(jīng)肌肉病生物醫(yī)藥監(jiān)測(cè)的準(zhǔn)確性，而且提高了針對(duì)神經(jīng)肌肉病生物醫(yī)藥的監(jiān)測(cè)效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種針對(duì)神經(jīng)肌肉病生物醫(yī)藥的監(jiān)測(cè)方法。

背景技術(shù)

遺傳性神經(jīng)肌肉病是一種表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)功能障礙的遺傳性疾病，主要包括遺傳性肌病、周圍神經(jīng)病、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病以及神經(jīng)肌肉接頭病等，又可細(xì)分出若干亞類，且各種亞型的臨床表現(xiàn)存在很大重疊。因此，常規(guī)的肌肉活檢、免疫組化、免疫熒光染色等檢查僅適用于部分亞型的確診，為此，相關(guān)人員設(shè)計(jì)出靶向捕獲的二代測(cè)序技術(shù)，用于增強(qiáng)對(duì)神經(jīng)肌肉病生物醫(yī)藥的監(jiān)測(cè)。

但現(xiàn)有的針對(duì)神經(jīng)肌肉病生物醫(yī)藥的監(jiān)測(cè)方法依然存在一定的問題，具體問題有以下幾點(diǎn)：

1、常規(guī)的監(jiān)測(cè)方法中，缺乏對(duì)DNA樣本的定量和擴(kuò)增處理，導(dǎo)致同一樣本的容量、檢測(cè)方案有限，難以對(duì)同一類疾病的多個(gè)致病基因進(jìn)行多組篩查，使得檢測(cè)結(jié)果數(shù)量偏少、誤差增大；

2、由于遺傳性神經(jīng)肌肉病的致病基因數(shù)目眾多，而現(xiàn)有技術(shù)中，針對(duì)最終結(jié)果的比對(duì)工作依舊需要較多的人工參與，不僅使得實(shí)際監(jiān)測(cè)效率偏低，而且浪費(fèi)了許多科研時(shí)間。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種針對(duì)神經(jīng)肌肉病生物醫(yī)藥的監(jiān)測(cè)方法，具備監(jiān)測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠、監(jiān)測(cè)效率高的優(yōu)點(diǎn)，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種針對(duì)神經(jīng)肌肉病生物醫(yī)藥的監(jiān)測(cè)方法，包括以下步驟：

A、提取基因組DNA：提取患者的基因組DNA，并對(duì)提取的基因組DNA進(jìn)行定量操作，然后分別裝入統(tǒng)一規(guī)格的培養(yǎng)皿中；

B、制備捕獲文庫(kù)：①將基因組DNA進(jìn)行片段化，②將片段化的基因組DNA進(jìn)行末端修復(fù)和3’末端添加堿基A，③將3’末端添加堿基A的產(chǎn)物連接擴(kuò)增接頭，④將連接產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，富集有效產(chǎn)物，⑤使用探針對(duì)富集的模板中的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行捕獲，⑥將捕獲的目標(biāo)片段分離，⑦加上完整接頭獲得捕獲文庫(kù)，并對(duì)捕獲到的目標(biāo)序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，再對(duì)文庫(kù)進(jìn)行定量操作；

C、高通量測(cè)序：上機(jī)測(cè)序，數(shù)據(jù)分析得到致病位點(diǎn)相關(guān)信息，再使用不同引物序列進(jìn)行前后兩次PCR擴(kuò)增，從而產(chǎn)生更多不同標(biāo)簽的引物；

D、分析總結(jié)：通過對(duì)所得測(cè)序數(shù)據(jù)與人類基因組的參考序列進(jìn)行對(duì)比，并對(duì)所測(cè)基因的每個(gè)突變位點(diǎn)情況進(jìn)行分析，得到神經(jīng)肌肉病相關(guān)基因突變位點(diǎn)，并總結(jié)所用生物靶向醫(yī)藥中有效成分的作用機(jī)理、指標(biāo)數(shù)據(jù)；

E、橫向比對(duì)：通過語義分析算法，從關(guān)聯(lián)文獻(xiàn)中提取相關(guān)檢測(cè)結(jié)果，生成所用生物靶向醫(yī)藥的綜合性能評(píng)價(jià)。

優(yōu)選的，所述步驟A中的提取方法包括純化柱純化、磁珠純化或酚氯仿提取。

優(yōu)選的，所述步驟A中的培養(yǎng)皿皆為玻璃材質(zhì)。

優(yōu)選的，所述步驟A與步驟B中的定量方法包括基于熒光定量原理的定量裝置定量、Q-PCR定量以及電泳定量。

優(yōu)選的，所述步驟B-①中的DNA片段化方法包括超聲破碎、轉(zhuǎn)座酶酶切以及限制性內(nèi)切酶酶切。

優(yōu)選的，所述步驟B-④⑦中皆采用DNA聚合酶對(duì)捕獲到的目標(biāo)序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增。