[發明專利]一種針對神經肌肉病生物醫藥的監測方法

在審

• 申請號: 202010595922.7
• 申請日: 2020-06-27
• 公開（公告）號: CN111676284A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 張銀冰
• 申請（專利權）人: 張銀冰
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6869
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種針對神經肌肉病生物醫藥的監測方法，其特征在于：包括以下步驟：

A、提取基因組DNA：提取患者的基因組DNA，并對提取的基因組DNA進行定量操作，然后分別裝入統一規格的培養皿中；

B、制備捕獲文庫：①將基因組DNA進行片段化，②將片段化的基因組DNA進行末端修復和3’末端添加堿基A，③將3’末端添加堿基A的產物連接擴增接頭，④將連接產物進行PCR擴增，富集有效產物，⑤使用探針對富集的模板中的目標區域進行捕獲，⑥將捕獲的目標片段分離，⑦加上完整接頭獲得捕獲文庫，并對捕獲到的目標序列進行PCR擴增，再對文庫進行定量操作；

C、高通量測序：上機測序，數據分析得到致病位點相關信息，再使用不同引物序列進行前后兩次PCR擴增，從而產生更多不同標簽的引物；

D、分析總結：通過對所得測序數據與人類基因組的參考序列進行對比，并對所測基因的每個突變位點情況進行分析，得到神經肌肉病相關基因突變位點，并總結所用生物靶向醫藥中有效成分的作用機理、指標數據；

E、橫向比對：通過語義分析算法，從關聯文獻中提取相關檢測結果，生成所用生物靶向醫藥的綜合性能評價。

2.根據權利要求1所述的一種針對神經肌肉病生物醫藥的監測方法，其特征在于：所述步驟A中的提取方法包括純化柱純化、磁珠純化或酚氯仿提取。

3.根據權利要求1所述的一種針對神經肌肉病生物醫藥的監測方法，其特征在于：所述步驟A中的培養皿皆為玻璃材質。

4.根據權利要求1所述的一種針對神經肌肉病生物醫藥的監測方法，其特征在于：所述步驟A與步驟B中的定量方法包括基于熒光定量原理的定量裝置定量、Q-PCR定量以及電泳定量。

5.根據權利要求1所述的一種針對神經肌肉病生物醫藥的監測方法，其特征在于：所述步驟B-①中的DNA片段化方法包括超聲破碎、轉座酶酶切以及限制性內切酶酶切。

6.根據權利要求1所述的一種針對神經肌肉病生物醫藥的監測方法，其特征在于：所述步驟B-④⑦中皆采用DNA聚合酶對捕獲到的目標序列進行PCR擴增。

7.根據權利要求1所述的一種針對神經肌肉病生物醫藥的監測方法，其特征在于：所述步驟B-⑤中的探針包括檢測CLCN1、SCN4A、CACNA1S、KCNJ2、TIA1、GNE、MYH7、NEB、FLNC、SEPN1、POMT2、VCP、DMD、MYOT、LMNA、CAV3、CAPN3、DYSF、SGCG、SGCA、SGCB、SGCD、TCAP、TRIM32、POMT1、ANO5、FKTN、BAG3、AGL、DAG1、PLEC以及EMD的探針。

8.根據權利要求1所述的一種針對神經肌肉病生物醫藥的監測方法，其特征在于：所述步驟C中第一次PCR擴增所采用的引物序列如下，

Primer F：

5’-ACACTCTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’；

Primer R：

5’-GTACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT-3’。

9.根據權利要求1所述的一種針對神經肌肉病生物醫藥的監測方法，其特征在于：所述步驟C中第二次PCR擴增所采用的引物序列如下，

TrueSeq Universal Primer：

5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’；

TrueSeq Primer-Index X：

5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATNNNNNNGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT-3’。