[發(fā)明專利]一種日本血吸蟲cfDNA及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010594692.2
• 申請日: 2020-06-28
• 公開（公告）號: CN111647665B
• 公開（公告）日: 2023-09-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程國鋒;劉靜宜;夏天奇
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所（中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心上海分中心）
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6806;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 上海旭誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

本發(fā)明公開了一種日本血吸蟲cfDNA及其應(yīng)用。其特征在于，包括四條所述日本血吸蟲cfDNA和四組所述日本血吸蟲cfDNA的PCR檢測引物，所述日本血吸蟲cfDNA來源于感染日本血吸蟲的宿主外周血液，所述日本血吸蟲cfDNA核苷酸序列為SEQ?NO.1至SEQ?NO.4所示，所述檢測引物核苷酸序列為SEQ?NO.5至SEQ?NO.12所示。本發(fā)明還公開了一種日本血吸蟲cfDNA序列的檢測方法。本發(fā)明還公開了一種日本血吸蟲檢測試劑盒。本發(fā)明還公開了一種日本血吸蟲cfDNA及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的四條日本血吸蟲cfDNA和檢測引物能夠有效的在宿主外周血液中檢測日本血吸蟲感染。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種日本血吸蟲cfDNA及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

血吸蟲病(Schistosomiasis)是一種重要的人獸共患寄生蟲病，對人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展造成嚴(yán)重威脅。在我國流行的日本血吸蟲(Schistosoma?japonicum)是引起血吸蟲病的重要病原。及時(shí)有效診斷日本血吸蟲感染對于我國血吸蟲病的防控具有重要作用。傳統(tǒng)的血吸蟲檢測主要通過從糞便中分離蟲卵并在顯微鏡下檢測，該方法耗時(shí)且易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。基于PCR及ELISA檢測方法的建立，使檢測更加精準(zhǔn)，然而，目前存在的日本血吸蟲診斷標(biāo)識分子仍十分有限。cfDNA(circulating?cell-free?DNA)是外周血液游離的DNA，是腫瘤檢測、妊娠診斷等過程中重要的標(biāo)識分子。

目前，有關(guān)日本血吸蟲cfDNA作為診斷標(biāo)識分子的報(bào)道十分有限。

因此，本領(lǐng)域的技術(shù)人員致力于開發(fā)一種通過高通量測序技術(shù)公開日本血吸蟲感染宿主后存在于宿主外周血中的特異性cfDNA片段，針對該cfDNA設(shè)計(jì)引物，采用PCR技術(shù)能夠快速有效診斷日本血吸蟲感染。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于現(xiàn)有技術(shù)的上述缺陷，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對存在于宿主外周血中的特異性cfDNA片段，設(shè)計(jì)引物，采用PCR技術(shù)能夠快速有效診斷日本血吸蟲感染。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種日本血吸蟲cfDNA序列，其特征在于，包括四條所述日本血吸蟲cfDNA，所述日本血吸蟲cfDNA來源于感染日本血吸蟲的宿主外周血液，所述日本血吸蟲cfDNA核苷酸序列為SEQ?NO.1至SEQ?NO.4所示。

本發(fā)明還提供了一種基于上述日本血吸蟲cfDNA序列的獲得方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)從所述感染日本血吸蟲的宿主外周血液中提取cfDNA；

(2)對所述提取cfDNA進(jìn)行高通量測序；

(3)對所述高通量測序的結(jié)果進(jìn)行生物信息分析。

進(jìn)一步地，所述步驟(3)中，對所述高通量測序的結(jié)果進(jìn)行生物信息分析包括所述日本血吸蟲cfDNA序列和所述日本血吸蟲cfDNA的PCR檢測引物，所述四條日本血吸蟲cfDNA對應(yīng)四組檢測引物，所述四組檢測引物核苷酸序列為SEQ?NO.5至SEQ?NO.12所示。

本發(fā)明還提供了一種基于上述日本血吸蟲cfDNA序列的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)提取cfDNA：從宿主外周血液中提取cfDNA；

(2)配制PCR體系：將所述提取cfDNA和所述檢測引物分別配制PCR管；

(3)PCR擴(kuò)增反應(yīng)：將所述配制PCR管置于PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)；

(4)PCR結(jié)果檢測：通過瓊脂糖凝膠電泳檢測所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)果。

進(jìn)一步地，所述步驟(1)中，采用QIAamp?Circulating?Nucleic?Acid?Kit試劑盒完成所述提取cfDNA。