[發(fā)明專利]一種日本血吸蟲cfDNA及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010594692.2
• 申請日: 2020-06-28
• 公開（公告）號: CN111647665B
• 公開（公告）日: 2023-09-05
• 發(fā)明（設計）人: 程國鋒;劉靜宜;夏天奇
• 申請（專利權）人: 中國農業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所（中國動物衛(wèi)生與流行病學中心上海分中心）
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6806;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

1.一種日本血吸蟲cfDNA序列組合，其特征在于，包括四條所述日本血吸蟲cfDNA，所述日本血吸蟲cfDNA來源于感染日本血吸蟲的宿主外周血液，所述日本血吸蟲cfDNA核苷酸序列為SEQ?NO.1至SEQ?NO.4所示。

2.一種擴增權利要求1所述四條日本血吸蟲cfDNA的引物組合，其特征在于，所述引物核苷酸序列為SEQ?NO.5至SEQ?NO.12所示。

3.一種日本血吸蟲檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的日本血吸蟲cfDNA序列組合和如權利要求2所述的引物組合。

4.如權利要求1所述的日本血吸蟲cfDNA序列組合和如權利要求2所述的引物組合在制備外周血中日本血吸蟲檢測試劑盒中的應用。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，包括如下步驟：

a)提取cfDNA：從宿主外周血液中提取cfDNA；

b)配制PCR體系：將所述提取cfDNA和所述檢測引物分別配制PCR管；

c)PCR擴增反應：將所述配制PCR管置于PCR儀中進行擴增反應；

d)PCR結果檢測：通過瓊脂糖凝膠電泳檢測所述PCR擴增反應結果。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于，所述步驟a)中，采用QIAamp?CirculatingNucleic?Acid?Kit試劑盒完成所述提取cfDNA。

7.如權利要求5所述的應用，其特征在于，所述步驟b)中，所述PCR擴增反應體系包括2xDreamTaq?Green?Master?Mix?12.5μl，上游所述日本血吸蟲cfDNA的PCR檢測引物0.5μl，下游所述日本血吸蟲cfDNA的PCR檢測引物0.5μl，所述提取cfDNA2μl；所述上游引物和所述下游引物濃度為10μM。

8.如權利要求5所述的應用，其特征在于，所述步驟c)中，所述PCR擴增反應程序為：95℃預變性3分鐘；95℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸1分鐘，共循環(huán)35次；72℃延伸10分鐘；4℃保存。

9.如權利要求5所述的應用，其特征在于，所述步驟d)中，所述瓊脂糖凝膠比例為1.2％-2％。