[發(fā)明專利]一種PCR熒光核酸檢測(cè)方法及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010592177.0
• 申請(qǐng)日: 2020-06-24
• 公開（公告）號(hào): CN113832220A
• 公開（公告）日: 2021-12-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡立磊;胡春瑞;豆傳國(guó);劉博;劉琦;陳昌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海駟格生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686;C12M1/38;C12M1/34;C12M1/00;B01L3/00
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219
• 代理人: 劉星

本發(fā)明提供一種PCR熒光核酸檢測(cè)方法及其應(yīng)用，該P(yáng)CR熒光核酸檢測(cè)方法包括以下步驟：采用微流體芯片進(jìn)行樣品的PCR核酸擴(kuò)增反應(yīng)；采用藍(lán)光激發(fā)樣品靶標(biāo)的熒光標(biāo)記分子，并采用PCR熒光檢測(cè)儀采集來(lái)自所述微流體芯片的熒光信號(hào)；采用黃光激發(fā)樣品內(nèi)標(biāo)的熒光標(biāo)記分子，并采用所述PCR熒光檢測(cè)儀采集來(lái)自所述微流體芯片的熒光信號(hào)；基于所述PCR熒光檢測(cè)儀采集的熒光信號(hào)進(jìn)行圖像處理與圖像分析，并進(jìn)行結(jié)果判斷。本發(fā)明的PCR熒光核酸檢測(cè)方法采用了微流體芯片，具有小型化、芯片化、檢測(cè)流程高度集成的特點(diǎn)，能夠?qū)崿F(xiàn)核酸PCR超快熒光檢測(cè)，可應(yīng)用于病毒、細(xì)菌、細(xì)胞、體液中的核酸類物質(zhì)的檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種PCR熒光核酸檢測(cè)方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

通常的病毒檢測(cè)有三種手段：全基因測(cè)序、核酸檢測(cè)、免疫蛋白檢測(cè)。針對(duì)疫情，CT技術(shù)也成為非常重要的檢測(cè)技術(shù)，但價(jià)格昂貴并且不便捷不適用于室外，比如海關(guān)、普通診所進(jìn)行檢測(cè)。相比而言，核酸檢測(cè)具有顯著優(yōu)勢(shì)，包括自動(dòng)化的檢測(cè)流程、高通量化，樣品進(jìn)數(shù)據(jù)出的大型平臺(tái)式檢測(cè)方式、即時(shí)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。然而目前市場(chǎng)上大多的核酸檢測(cè)PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，英文名稱：polymerase chain reaction)儀不便攜、速度慢(30分鐘以上的PCR擴(kuò)增過(guò)程)、且價(jià)格昂貴。

因此，如何提供一種PCR熒光核酸檢測(cè)方法及其應(yīng)用，使得檢測(cè)流程高度集成，并加快檢測(cè)速度，成為本領(lǐng)域技術(shù)人員亟待解決的一個(gè)重要技術(shù)問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種PCR熒光核酸檢測(cè)方法及其應(yīng)用，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中核酸檢測(cè)集成度低、速度慢的問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供PCR熒光核酸檢測(cè)方法，包括以下步驟：

采用微流體芯片進(jìn)行樣品的PCR核酸擴(kuò)增反應(yīng)；

采用藍(lán)光激發(fā)樣品靶標(biāo)的熒光標(biāo)記分子，并采用PCR熒光檢測(cè)儀采集來(lái)自所述微流體芯片的熒光信號(hào)；

采用黃光激發(fā)樣品內(nèi)標(biāo)的熒光標(biāo)記分子，并采用所述PCR熒光檢測(cè)儀采集來(lái)自所述微流體芯片的熒光信號(hào)；

基于所述PCR熒光檢測(cè)儀采集的熒光信號(hào)進(jìn)行圖像處理與圖像分析，并進(jìn)行結(jié)果判斷。

可選地，所述PCR核酸擴(kuò)增反應(yīng)包括多個(gè)循環(huán)階段，一個(gè)循環(huán)階段依序包括升溫階段、裂解階段、降溫階段及擴(kuò)增階段。

可選地，所述循環(huán)階段的數(shù)量范圍是30-50個(gè)。

可選地，在每個(gè)循環(huán)階段的所述擴(kuò)增階段，于第一時(shí)間開啟藍(lán)光，于第二時(shí)間關(guān)閉藍(lán)光，于第三時(shí)間開啟黃光，于第四時(shí)間關(guān)閉黃光，其中，所述第一時(shí)間早于所述第二時(shí)間，所述第二時(shí)間早于所述第三時(shí)間，所述第三時(shí)間早于所述第四時(shí)間。

可選地，在每個(gè)循環(huán)階段的所述擴(kuò)增階段，于第五時(shí)間開始采集藍(lán)光激發(fā)的熒光信號(hào)，于第六時(shí)間停止采集藍(lán)光激發(fā)的熒光信號(hào)，于第七時(shí)間開始采集黃光激發(fā)的熒光信號(hào)，于第八時(shí)間停止采集黃光激發(fā)的熒光信號(hào)，其中，所述第五時(shí)間晚于所述第一時(shí)間并早于所述第六時(shí)間，所述第六時(shí)間不晚于所述第二時(shí)間，所述第七時(shí)間晚于所述第三時(shí)間并早于所述第八時(shí)間，所述第八時(shí)間不晚于所述第四時(shí)間。

可選地，所述PCR熒光檢測(cè)儀采用連續(xù)拍照或視頻流的方式采集來(lái)自所述微流體芯片的熒光信號(hào)，其中，每一幀圖像的曝光時(shí)間小于所述第二時(shí)間與所述第一時(shí)間之差，并小于所述第四時(shí)間與所述第三時(shí)間之差。

可選地，在每個(gè)循環(huán)階段的所述擴(kuò)增階段，提取至少一張?zhí)幱谒{(lán)光開啟階段的圖像幀保存以供分析，提取至少一張?zhí)幱邳S光開啟階段的圖像幀保存以供分析。

可選地，在每個(gè)循環(huán)階段的所述擴(kuò)增階段，當(dāng)提取多張?zhí)幱谒{(lán)光或黃光開啟階段的圖像幀保存時(shí)，將多張采集的圖像幀的像素進(jìn)行平均。