[發(fā)明專利]一種檢測即食生鮮果蔬中肺炎克雷伯菌的質(zhì)譜方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010587695.3 | 申請日： | 2020-06-24 |
| 公開（公告）號： | CN111876343A | 公開（公告）日： | 2020-11-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 魏超;代曉航;劉煒;郭靈安 | 申請（專利權(quán)）人： | 四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測試中心 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N1/02;G01N33/68;G01N27/62;C12R1/22 |
| 代理公司： | 北京勁創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11589 | 代理人： | 曹玉清 |
| 地址： | 610000 *** | 國省代碼： | 四川;51 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 檢測 即食 生鮮 果蔬中 肺炎 克雷伯菌 方法 | ||
1.一種檢測即食生鮮果蔬中肺炎克雷伯菌的質(zhì)譜方法，包括即食果蔬中肺炎克雷伯菌分離培養(yǎng)基及方法，肺炎克雷伯菌質(zhì)譜鑒定的前處理方法及質(zhì)譜條件。其特征在于一下步驟：
S1:即食果蔬中肺炎克雷伯菌特異性選擇培養(yǎng)制備；
S2:從果蔬中分離肺炎克雷伯菌分離方法的建立；
S3:提取果蔬中分離疑似肺炎克雷伯菌蛋白質(zhì)成分；
S4:使用基質(zhì)解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜收集肺炎克雷伯菌蛋白圖譜，采用特征峰擬合的方法進(jìn)行鑒定。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的針對即食生鮮果蔬中肺炎克雷伯菌特異性篩選培養(yǎng)基,優(yōu)選的S1為改良枸櫞酸液體培養(yǎng)基，S1特征在于配方及功效為(/L)：枸椽酸鈉為碳源5.0g，磷酸二氫銨為氮源1.0g，磷酸氫二鉀為緩沖劑0.5g、磷酸氫二鉀為緩沖劑1.5g，溴麝香草酚蘭為顯色劑0.05g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測即食生鮮果蔬中肺炎克雷伯菌篩選方法S2，S2其特征在于以下步驟：
S21:改良枸櫞酸液體培養(yǎng)基為前增菌液進(jìn)行增菌36℃±1℃培養(yǎng)6～12h；
S22:MAC選擇培養(yǎng)基進(jìn)行分離,36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h；
S23:兔血瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行傳代,36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測即食生鮮果蔬中肺炎克雷伯菌的質(zhì)譜方法質(zhì)譜鑒定方S3，其特征在于包含以下步驟：
S31采用75％酒精對肺炎克雷伯菌進(jìn)行菌的糖類物質(zhì)進(jìn)行沉淀，40KHz超聲10min，8000r/min離心2min；
S32:70％甲酸和100％乙腈(1:1),8000r/min離心1min,對肺炎克雷伯菌的蛋白質(zhì)進(jìn)行提取；
S33:CHCA作為肺炎克雷伯菌蛋白質(zhì)輔助解析基質(zhì)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對果蔬分離肺炎克雷伯菌的質(zhì)譜條件設(shè)置S4，特征為固定聚焦338nm，檢測器電子倍增管(multipledynode)線性模式，正離子模式收集，激光束能頻75～80Hz，每樣品100次收集峰疊加(包括0.8％的偏差率)。
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