[發(fā)明專利]一種呈遞并激活HSV-1型溶瘤病毒的CAR-T技術(shù)及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010586837.4
• 申請日: 2020-06-24
• 公開（公告）號: CN111676199B
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張同存;祝海川;張子健;周勇;顧潮江
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢波睿達(dá)生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C07K19/00;C12N9/22;C12N5/10;A61K39/00;A61K35/763;A61K47/68;A61P35/00
• 代理公司: 北京君有知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11630
• 代理人: 焦麗雅

本發(fā)明公開了一種具有殺傷實(shí)體腫瘤細(xì)胞的系統(tǒng)，包含HSV?1型溶瘤病毒、嵌合型抗原受體和scFv?synNotch?Cre元件；其中scFv為靶向腫瘤特異性抗原的單鏈抗體，Notch為Notch跨膜和剪切位點(diǎn)核心元件，Cre為基于Loxp位點(diǎn)的重組酶；本發(fā)明所述系統(tǒng)通過CAR?T細(xì)胞精確呈遞并激活HSV?1型溶瘤病毒復(fù)制，起到聯(lián)合治療實(shí)體腫瘤的作用，無任何毒副作用，且效果卓越。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種CAR-T細(xì)胞與溶瘤病毒聯(lián)合的技術(shù)及其應(yīng)用，具體是指一種基于synNotch-Cre系統(tǒng)的CAR-T細(xì)胞特異性呈遞并精確激活具有開關(guān)的HSV-1型溶瘤病毒的技術(shù)和應(yīng)用。

背景技術(shù)

嵌合抗原受體T細(xì)胞療法(CAR-T Immunotherapy)療法是一種新興的過繼性免疫療法，是繼手術(shù)和化療以外又一惡性腫瘤治療的新策略，在B細(xì)胞急性白血病治療方面以高達(dá)90％的完全緩解率獲得大眾的認(rèn)可。2017年美國FDA相繼批準(zhǔn)兩款CAR-T免疫治療產(chǎn)品Kymriah(tisagenlecleucel，CTL-019)和Yescarta(axicabtagene ciloleucel，KTE-C10)上市，分別應(yīng)用于治療用于治療復(fù)發(fā)或難治性(r/r)兒童和年輕成人B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病和難治、復(fù)發(fā)型成人大B細(xì)胞淋巴瘤患者。

CAR-T細(xì)胞療法在血液惡性腫瘤治療方面取得了良好的療效，但在實(shí)體腫瘤治療中卻有明顯的短板，主要由于實(shí)體腫瘤有致密的腫瘤組織和更為復(fù)雜的腫瘤微環(huán)境，使CAR-T細(xì)胞難以從血液中浸潤至腫瘤病灶，實(shí)體腫瘤細(xì)胞自身常表達(dá)PD-L1抗原以及微環(huán)境中常存在調(diào)節(jié)型T細(xì)胞(Treg)、骨髓來源的抑制性細(xì)胞(MDSCs)等使少量CAR-T浸潤入后難以存活增殖和實(shí)行殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。

令人興奮的是溶瘤病毒療法剛好是針對實(shí)體腫瘤治療而新興的免疫療法并可以較完美地補(bǔ)足CAR-T細(xì)胞在實(shí)體腫瘤治療中的缺陷。2015年10月美國FDA批準(zhǔn)首個溶瘤病毒產(chǎn)品talimogene laherparepvec(T-vec,Imlygic)用于復(fù)發(fā)或不可切除病灶的黑色素瘤治療。溶瘤病毒是一種經(jīng)過基因編輯后可特異性在增殖通路被過度活化的腫瘤細(xì)胞內(nèi)部復(fù)制和裂解而在正常組織和細(xì)胞中復(fù)制受抑制的病毒，由于溶瘤病毒特異性裂解腫瘤細(xì)胞的能力和臨近細(xì)胞傳播的特性，使溶瘤病毒在實(shí)體腫瘤治療中獨(dú)具優(yōu)勢，可以有效地裂解腫瘤細(xì)胞，破壞腫瘤微環(huán)境并在裂解腫瘤細(xì)胞的同時釋放腫瘤相關(guān)抗原激活體內(nèi)免疫反應(yīng)，與CAR-T療法形成較完美的互補(bǔ)殺傷實(shí)體腫瘤的作用。

但溶瘤病毒大多采用瘤內(nèi)給藥的方式給藥，當(dāng)病灶比較隱匿如在顱骨內(nèi)部或器官內(nèi)部時瘤內(nèi)給藥較難實(shí)施，而靜脈給藥易被機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)消滅和在肝臟部位積聚不能達(dá)到理想的抗腫瘤效果，因此開發(fā)溶瘤病毒給藥方案以及和CAR-T聯(lián)合應(yīng)用方案仍然是急需解決的腫瘤治療難題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于，為解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種具有殺傷實(shí)體腫瘤細(xì)胞的系統(tǒng)及其制備方法和應(yīng)用，該系統(tǒng)通過CAR-T細(xì)胞精確呈遞并激活HSV-1型溶瘤病毒復(fù)制，起到聯(lián)合治療實(shí)體腫瘤的作用，且效果卓越。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案。

本發(fā)明提供了一種具有殺傷實(shí)體腫瘤的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包含HSV-1型溶瘤病毒、嵌合型抗原受體(CAR)和scFv-synNotch-Cre元件。

較佳的，所述HSV-1型溶瘤病毒可源于HSV-1多種毒株改造而成，優(yōu)選以下毒株中的一種或多種：HSV-1JS1、HSV-1F、HSV-1 17、HSV-1E19、HSV-1KOS、HSV-1v23、HSV-1v29以及其它臨床野生毒株如HSV1-2006-50683、HSV1-2009-20371、HSV1-2011-3153等；更優(yōu)選為HSV-1 17。