[發(fā)明專利]一種呈遞并激活HSV-1型溶瘤病毒的CAR-T技術(shù)及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010586837.4
• 申請日: 2020-06-24
• 公開（公告）號: CN111676199B
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張同存;祝海川;張子健;周勇;顧潮江
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢波睿達(dá)生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C07K19/00;C12N9/22;C12N5/10;A61K39/00;A61K35/763;A61K47/68;A61P35/00
• 代理公司: 北京君有知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11630
• 代理人: 焦麗雅

1.一種具有殺傷實(shí)體腫瘤細(xì)胞的系統(tǒng)，其特征在于包含HSV-1型溶瘤病毒、嵌合型抗原受體T細(xì)胞和scFv-synNotch-Cre元件；其中scFv為靶向腫瘤特異性抗原的單鏈抗體，synNotch為Notch跨膜和剪切位點(diǎn)核心元件，Cre為基于Loxp位點(diǎn)的重組酶；

所述HSV-1型溶瘤病毒缺失ICP34.5基因和ICP47基因，且ICP4基因前同源重組插入CMV啟動(dòng)子和轉(zhuǎn)錄終止序列Loxp-Stop-Loxp，所述Stop由基因的CDS區(qū)和轉(zhuǎn)錄終止信號順次連接而成；

所述嵌合型抗原受體T細(xì)胞包括信號肽、ScFv、Strep tagⅡ、CD8 hinge、CD28TM+ICD、4-1BB和CD3ζ；

所述scFv為抗EGFR vIII或HER2的單鏈抗體。

2.如權(quán)利要求1所述的系統(tǒng)，其中，所述基因CDS區(qū)為熒光蛋白基因，所述轉(zhuǎn)錄終止信號的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述Loxp的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

3.如權(quán)利要求2所述的系統(tǒng)，其中，所述熒光蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

4.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的系統(tǒng)，其中，所述scFv-synNotch-Cre元件包括信號肽、scFv、Flag、Notch Core和Cre重組酶。

5.如權(quán)利要求4所述的系統(tǒng)，其中，所述信號肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述scFv可特異性識別實(shí)體腫瘤表面的特異性蛋白；所述Notch Core的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示；所述Cre重組酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

6.如權(quán)利要求5所述的系統(tǒng)，其中所述嵌合型抗原受體包括信號肽、ScFv、Strep tagⅡ、CD8 hinge、CD28TM+ICD、4-1BB和CD3ζ；所述信號肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述Strep tagⅡ的氨基酸序列如SEQ ID NO.30所示；所述 ScFv可特異性識別實(shí)體腫瘤表面的特異性蛋白；所述CD8 hinge的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述CD28TM+ICD的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述4-1BB的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述CD3ζ的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。

7. 如權(quán)利要求5或6所述的系統(tǒng)，其中，所述scFv為抗EGFR vIII或HER2的單鏈抗體；所述scFv由重鏈可變區(qū)VH、連接多肽Linker和輕鏈可變區(qū)VL組成；其中EGFR vIII-scFv重鏈可變區(qū)VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示，EGFR vIII-scFv輕鏈可變區(qū)VL的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示；HER2-scFv重鏈可變區(qū)VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示，HER2-scFv輕鏈可變區(qū)VL的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；所述連接多肽Linker的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示。

8.一種免疫細(xì)胞，其特征在于，所述免疫細(xì)胞為T細(xì)胞，所述T細(xì)胞包含權(quán)利要求1-3或5-6任一項(xiàng)所述的HSV-1型溶瘤病毒、嵌合型抗原受體和scFv-synNotch-Cre元件。

9.權(quán)利要求1-3或5-6任一項(xiàng)所述的系統(tǒng)在制備預(yù)防或/和治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。