[發明專利]一種MSC體外擴增方法

在審

• 申請號: 202010584282.X
• 申請日: 2020-06-24
• 公開（公告）號: CN111690604A
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發明（設計）人: 曹哲厚;鄭海剛;韋俊;吳立前
• 申請（專利權）人: 杭州原生生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 杭州橙知果專利代理事務所(特殊普通合伙) 33261
• 代理人: 賀龍萍

本發明提供了一種MSC體外擴增方法，屬于細胞擴增技術領域。它解決了目前間充質干細胞的來源受到限制等問題，一種MSC體外擴增方法，包括如下步驟：S01：將MSPM膜浸潤在水中，制備得到MSPM混合液；將間充質干細胞重懸于第一培養基中，制備得到MSC細胞懸液；S02：取MSPM混合液，并棄掉上清液，用第二培養基重懸，然后放入培養箱中進行培養，再次棄掉上清液，然后用MSC細胞懸液浸潤MSPM載體，之后補加第一培養基，放入培養箱中進行培養。本發明具有能體外擴增MSC等優點。

技術領域

本發明屬于細胞擴增技術領域，特別涉及一種MSC體外擴增方法。

背景技術

MSC是指間充質干細胞，是干細胞的一種，能分化為間質組織。間充質干細胞因能分化為間質組織而得名，具有亞全能分化潛能，在特定的體內外環境下，能夠誘導分化成為多種組織細胞。間充質干細胞具有干細胞的共性，即自我更新、多向分化和歸巢的能力。間充質干細胞可以分化為神經、心臟、肝臟、骨、軟骨、肌腱、脂肪、上皮等多種細胞。這種多向分化的能力給人類多種疾病的治療提供了重要的原材料。

目前間充質干細胞的主要來源為成人骨髓，但成人骨髓源間充質干細胞細胞數量及增殖分化潛能隨年齡的增大而下降，病毒感染率較高，且供者間充質干細胞的采集須行骨髓穿刺術，來源受到限制，從而使間充質干細胞的臨床應用受到限制。因此，發明一種體外擴增間充質干細胞的方法來解決上述問題很有必要。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中存在的上述問題，提供了一種MSC體外擴增方法。

本發明的目的可通過下列技術方案來實現：一種MSC體外擴增方法，包括如下步驟：

S01：將MSPM膜浸潤在水中，制備得到MSPM混合液；將間充質干細胞重懸于第一培養基中，制備得到MSC細胞懸液；

S02：取MSPM混合液，并棄掉上清液，用第二培養基重懸，然后放入培養箱中進行培養，再次棄掉上清液，然后用MSC細胞懸液浸潤MSPM載體，之后補加第一培養基，放入培養箱中進行培養。

優選地，步驟S02中，取MSPM混合液，并棄掉上清液，用第二培養基重懸，重懸液加入孔板中，再放入培養箱中培養，再次棄掉上清液后每孔加入MSC細胞懸液浸潤MSPM載體，之后補加第一培養基，將孔板放入培養箱中進行間充質干細胞的培養。

優選地，步驟S02中，在間充質干細胞培養的第1個小時內，每隔15min拿出孔板進行搖晃混勻，在間充質干細胞培養的第3個小時后，補加第一培養基。

優選地，步驟S02中，在間充質干細胞培養的三天后，吸走每個孔中原有的第一培養液，重新加入新鮮的第一培養液。

優選地，所述的培養箱為二氧化碳含量為5％的CO²培養箱。

優選地，所述的第一培養基為友康無血清培養基；所述的第二培養基為DMEM HG培養基。

優選地，步驟S01中，MSC細胞懸液的密度為1*10⁶cells/mL。

本發明的工作原理：本發明采用MSPM膜作為載體，對間充質干細胞進行培養，步驟簡單，培養效率高。

與現有技術相比，本發明具有以下優點：

1.本發明采用MSPM膜作為載體，其成分是聚對二甲苯，適合長期植入人體，是一種生物相容涂層材料。生物穩定性好、細胞毒性低和還具有抗水解性。

2.本發明發明了一種MSC體外擴增方法，能有效的體外擴增MSC。

附圖說明

圖1是本發明在第1天的時候，在顯微鏡下觀察MSPM上的MSC細胞，物鏡的放大倍數4倍的顯微鏡放大圖；