[發明專利]同時檢測4種A組柯薩奇病毒亞型的核酸組合物及其試劑盒和檢測方法

在審

• 申請號: 202010581905.8
• 申請日: 2020-06-23
• 公開（公告）號: CN111647691A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 鄧春興;李泓彥
• 申請（專利權）人: 深圳市艾偉迪生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
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• 代理人: 暫無信息

本發明公開了同時檢測4種A組柯薩奇病毒亞型的核酸組合物及其試劑盒和檢測方法，屬于體外分子檢測領域。所述核酸組合物包括以下序列：CA2F:SEQ ID No：1；CA2R:SEQ ID No：2；CA2P:SEQ ID No：3；CA4F:SEQ ID No：4；CA4R:SEQ ID No：5；CA4P:SEQ ID No：6；CA5F:SEQ ID No：7；CA5R:SEQ ID No：8；CA5P:SEQ ID No：9；CA8F:SEQ ID No：10；CA8R:SEQ ID No：11；CA8P:SEQ ID No：12。本發明能夠快速準確的對柯薩奇病毒四種亞型進行篩查，特異性好。

技術領域

本發明涉及體外分子檢測技術領域，特別涉及一種同時檢測4種A組柯薩奇病毒亞型的核酸組合物及其試劑盒和檢測方法。

背景技術

柯薩奇病毒(coxsachie virus)是一種腸病毒，分為A和B兩型，其中A型包含24種亞型，B型包含5種不同亞型。柯薩奇病毒A型感染表現為上呼吸道感染起病急，流涕、咳嗽、咽痛、發熱，全身不適；柯薩奇病毒B型感染引起特征性傳染性胸肋痛，可合并腦膜腦炎、心肌炎、發熱、肝炎、溶血性貧血和肺炎。

目前對于體外病毒RNA的核酸檢測方法主要包括一步法RT-PCR法，熒光染料RT-PCR法和熒光探針RT-PCR法。其中一步法RT-PCR法由于需要進行開蓋電泳，容易導致實驗室污染，不宜大范圍使用；而熒光染料RT-PCR法由于其熒光顯色原理導致其易出現假陽性結果，因此也不適合臨床檢測。熒光探針RT-PCR法由于其特異性高、靈敏度高等優勢，目前是國內外應用最為廣泛的技術方法之一。該方法的原理主要基于標記不同顏色Taq-Man熒光探針，結合相關熒光檢測系統儀器，達到檢測的目的。

現有的檢測柯薩奇病毒相關的試劑盒大多采用單重或雙重熒光探針方法實現對柯薩奇不同亞型的快速診斷，但是由于柯薩奇病毒亞型多，無法達到快速對柯薩奇病毒眾多亞型進行分型檢測的目的。另外，現有的柯薩奇病毒檢測試劑盒大多針對CA16或CA10，很少有針對A2、A4、A5或A8型的柯薩奇病毒，給A2、A4、A5或A8型柯薩奇病毒的檢測帶來困難。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明的目的是提供一種同時檢測4種A組柯薩奇病毒亞型的核酸組合物及其試劑盒和檢測方法，本發明能夠在一管反應中同時檢測A2 型，A4型，A5型和A8型的靶基因，通量高，檢測速度快。

本發明的上述技術目的是通過以下技術方案得以實現的：

一種同時檢測4種A組柯薩奇病毒亞型的核酸組合物，包括以下引物和探針序列：

CA2上游引物 ACAAGGATTCTTACGCAGCTTCGGCAG SEQ ID No：1

CA2下游引物 GCAGAGCGTCCAATACAG SEQ ID No：2

CA2探針 ACAAGGATTCTTACGCAGCTTCGGCAG SEQ ID No：3

CA4上游引物 AGTCCACCACCACAAGTG SEQ ID No：4

CA4下游引物 GACACTGCCCGTAGGATAG SEQ ID No：5

CA4探針 ATGTCACCAGCCAGTGCCTATCAGTGG SEQ ID No：6

CA5上游引物 GTGAGCAACAGAGCGATTG SEQ ID No：7

CA5下游引物 GTGGAGTTACCGACAGTGA SEQ ID No：8