[發(fā)明專利]同時檢測4種A組柯薩奇病毒亞型的核酸組合物及其試劑盒和檢測方法

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• 申請日: 2020-06-23
• 公開（公告）號: CN111647691A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發(fā)明（設計）人: 鄧春興;李泓彥
• 申請（專利權）人: 深圳市艾偉迪生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種同時檢測4種A組柯薩奇病毒亞型的核酸組合物，其特征在于：包括以下引物和探針序列：

CA2上游引物序列SEQ ID No：1；

CA2下游引物序列SEQ ID No：2；

CA2探針序列SEQ ID No：3；

CA4上游引物序列SEQ ID No：4；

CA4下游引物序列SEQ ID No：5；

CA4探針序列SEQ ID No：6；

CA5上游引物序列SEQ ID No：7；

CA5下游引物序列SEQ ID No：8；

CA5探針序列SEQ ID No：9；

CA8上游引物序列SEQ ID No：10；

CA8下游引物序列SEQ ID No：11；

CA8探針序列SEQ ID No：12。

2.一種同時檢測4種A組柯薩奇病毒亞型的試劑盒，其特征在于：包括權利要求1所述的核酸組合物、dNTP、RT-PCR buffer、酶液和ddH₂O。

3.根據權利要求2所述的同時檢測4種A組柯薩奇病毒亞型的試劑盒，其特征在于：所述RT-PCR buffer為10×RT-PCR buffer，包含400mM tris-base、0.5% TritonX-100、80mMMgCl₂和5%甘油。

4.根據權利要求2所述的同時檢測4種A組柯薩奇病毒亞型的試劑盒，其特征在于：所述酶液包含逆轉錄酶M-MLV、熱啟動化學修飾Taq DNA聚合酶、RNA酶抑制劑和Taq酶稀釋液。

5.根據權利要求4所述的同時檢測4種A組柯薩奇病毒亞型的試劑盒，其特征在于：所述逆轉錄酶M-MLV、熱啟動化學修飾Taq DNA聚合酶、RNA酶抑制劑和Taq酶稀釋液混合的體積比為1：3：2：4。

6.一種同時檢測4種A組柯薩奇病毒亞型的方法，其特征在于：采用熒光探針RT-PCR法，熒光定量PCR擴增反應體系為：

2.5mM/mL dNTP 1-2μL；

10×RT-PCR buffer 2.5μL；

50pmol/μL權利要求1 CA2上游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL權利要求1 CA2下游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL權利要求1 CA4上游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL權利要求1 CA4下游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL權利要求1 CA5上游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL權利要求1 CA5下游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL權利要求1 CA8上游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL權利要求1 CA8下游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL權利要求1 CA2探針 0.03-0.08μL；

50pmol/μL權利要求1 CA4探針 0.1-0.15μL；

50pmol/μL權利要求1 CA5探針 0.05-0.1μL；

50pmol/μL權利要求1 CA8探針 0.1-0.15μL；

酶液 1-2μL；

核酸模板 0.5~5μL；

ddH₂O 補至25μL。