[發(fā)明專利]基于GC-MS技術分析金鐵鎖中揮發(fā)油及脂肪酸的方法

在審

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• 申請日: 2020-06-23
• 公開（公告）號: CN111551665A
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發(fā)明（設計）人: 鄭林;黃勇;李月婷;晏婷;鞏仔鵬;王愛民;楊暢;陸苑;陳思穎;潘潔;馬雪
• 申請（專利權）人: 貴州醫(yī)科大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 李余江

本發(fā)明公開了一種基于GC?MS技術分析金鐵鎖中揮發(fā)油及脂肪酸的方法，該方法采用水蒸氣蒸餾法提取金鐵鎖中揮發(fā)油，通過GC?MS對其揮發(fā)油化學成分進行分析與鑒定；利用索氏提取法提取金鐵鎖中脂肪酸，通過GC?MS對甲酯化后的脂肪酸進行分析。通過峰面積歸一化法計算各成分的相對含量，鑒別金鐵鎖的化學成分。該方法從金鐵鎖揮發(fā)油中共鑒定出50種化學成分，其相對含量占揮發(fā)油總量78.69％。本發(fā)明建立的金鐵鎖揮發(fā)油和脂肪酸化學成分GC?MS分析方法操作簡單、迅速靈敏、準確度高，可為金鐵鎖質(zhì)量評價提供參考。

技術領域

本發(fā)明涉及一種基于GC-MS技術分析金鐵鎖中揮發(fā)油及脂肪酸的方法，屬于醫(yī)藥技術領域。

背景技術

金鐵鎖為石竹科單屬種植物金鐵鎖Psammosilene tunicoides W.C.Wu etC.Y.Wu的干燥根，異名獨丁子、獨定子、蜈蚣七等，是我國西南部特有的單種屬植物和傳統(tǒng)的藥用植物，首載于《滇南本草》，其后又被列入《中國藥典》和《中華本草》^[1-2]。主要分布于四川、貴州、云南、西藏等地，主治跌打損傷、風濕病、胃痛、癰疽瘡癤、創(chuàng)傷出血等^[1]。

金鐵鎖具有良好的臨床應用價值，隨著市場需求增大，由于人為過度采挖和生境遭到破壞，金鐵鎖野生資源枯竭，已作為稀有瀕危物種列于《中國植物紅皮書》中，現(xiàn)已列入國家二級重點保護植物^[1,3]。金鐵鎖的主要化學成分是三萜、三萜皂苷、環(huán)肽、內(nèi)酰胺、氨基酸和有機酸等^[4]。現(xiàn)代藥理研究表明，金鐵鎖具有較好的鎮(zhèn)痛和抗炎作用^[5]。

目前，對于金鐵鎖中化學成分研究的報道較多^[6-7]，金鐵鎖揮發(fā)油的研究偶見報道且分析成分較少^[8]，而對于金鐵鎖脂肪酸的提取和分析未見國內(nèi)外文獻報道。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，脂肪酸在人體中有著極其重要的作用，飽和脂肪酸有著其獨特的生理作用，不飽和脂肪酸有促進細胞生長、免疫調(diào)節(jié)、抗癌、保肝、降血糖等作用^[9]。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種基于GC-MS技術分析金鐵鎖中揮發(fā)油及脂肪酸的方法，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(GC-MC)研究分析金鐵鎖藥材中揮發(fā)油和脂肪酸成分，建立一種簡單、迅速、靈敏、準確度高的分析方法，為金鐵鎖的品質(zhì)評價、藥理作用的深入研究及進一步開發(fā)利用提供了科學依據(jù)。

本發(fā)明的技術方案是這樣實現(xiàn)的；

一種基于GC-MS技術分析金鐵鎖中揮發(fā)油及脂肪酸的方法，該方法是采用水蒸氣蒸餾法提取金鐵鎖中揮發(fā)油，通過GC-MS對其揮發(fā)油化學成分進行分析與鑒定；利用索氏提取法提取金鐵鎖中脂肪酸，通過GC-MS對甲酯化后的脂肪酸進行分析；通過峰面積歸一化法計算各成分的相對含量，鑒別金鐵鎖的化學成分。

其中，水蒸氣蒸餾法提取金鐵鎖中揮發(fā)油包括如下步驟：采用《中國藥典》2015年版四部揮發(fā)油提取裝置，采用水蒸氣蒸餾法提取；稱取干燥金鐵鎖粗粉200g，置于圓底燒瓶中，加入1200mL超純水；加入3mL正己烷置于揮發(fā)油提取器中，連接揮發(fā)油提取器和蒸餾裝置后，采用水蒸氣蒸餾法蒸餾8h，收集正己烷層，經(jīng)無水硫酸鈉脫水干燥后，密封、-20℃保存，作為供試品溶液。

新一步的，索氏提取法提取金鐵鎖中脂肪酸包括如下步驟：稱取干燥金鐵鎖粗粉5g，裝入由定性濾紙折疊成的濾紙筒置于索氏提取器中，加入50mL石油醚，回流萃取8h，得到淡黃色萃取液，減壓回收石油醚，得到黃色油狀液體。

新一步的，脂肪酸的甲酯化包括如下步驟：在黃色油狀液體中加入0.5mol/L氫氧化鈉甲醇溶液5mL，水浴回流皂化30min，至油珠全部消失；再加入體積分數(shù)14％三氟化硼乙醚甲醇溶液2mL，酯化30min，放冷；精密加入正己烷5mL，水浴上繼續(xù)回流5min，放冷；轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加飽和氯化鈉溶液5mL，振搖，靜置分層，吸取上清液，用少量水洗滌，無水硫酸鈉干燥，密封、-20℃保存，作為供試品溶液。