[發(fā)明專利]一種構(gòu)建偽狂犬病毒基因缺失弱毒株的方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010580858.5
• 申請日: 2020-06-23
• 公開（公告）號: CN111635891B
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 商營利;孔正杰
• 申請（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/90;C12N15/85;A61K39/245;A61P31/22;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 莫舒穎

1.一種構(gòu)建重組偽狂犬病毒的方法，其特征在于：包括降低目的偽狂犬病毒中UL13蛋白活性、降低目的偽狂犬病毒中UL13蛋白含量或/和降低目的偽狂犬病毒中UL13基因的表達量，得到構(gòu)建的重組偽狂犬病毒；所得重組偽狂犬病毒誘導(dǎo)的宿主I型IFN基因表達量高于所述目的偽狂犬病毒；所述目的偽狂犬病毒為偽狂犬病毒Bartha-K61株；所述UL13蛋白的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示；

所述降低目的偽狂犬病毒中UL13蛋白活性、降低目的偽狂犬病毒中UL13蛋白含量或/和降低目的偽狂犬病毒中UL13基因的表達量，是通過敲除所述目的偽狂犬病毒中所述UL13基因?qū)崿F(xiàn)的；所述敲除所述目的偽狂犬病毒中所述UL13基因是利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)實現(xiàn)的；所述CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)包括包含sgRNA的載體，所述sgRNA的序列是核苷酸序列分別為SEQ ID No.4和SEQ ID No.5的兩個單鏈DNA。

2.權(quán)利要求1所述的方法構(gòu)建的重組偽狂犬病毒。

3.物質(zhì)在構(gòu)建重組偽狂犬病毒中的應(yīng)用，其特征在于：所述物質(zhì)為權(quán)利要求1中降低偽狂犬病毒中UL13蛋白活性、降低偽狂犬病毒中UL13蛋白含量或/和降低偽狂犬病毒中所述UL13基因的物質(zhì)；所述物質(zhì)為以下B1)-B5)中的任一種：

B1)核苷酸序列分別為SEQ ID No.4和SEQ ID No.5的兩個單鏈DNA；

B2)編碼B1)所述兩個單鏈DNA的核酸分子；

B3)含有B2)所述核酸分子的表達盒；

B4)含有B2)所述核酸分子的重組載體、或含有B3)所述表達盒的重組載體；

B5)含有B2)所述核酸分子的重組微生物、或含有B3)所述表達盒的重組微生物、或含有B4)所述重組載體的重組微生物。

4.下述任一種應(yīng)用：

P1、權(quán)利要求1所述的方法、權(quán)利要求2所述的重組偽狂犬病毒或權(quán)利要求3所述的應(yīng)用在制備偽狂犬病毒疫苗中的應(yīng)用或在制備調(diào)控偽狂犬病毒免疫抑制產(chǎn)品中的應(yīng)用；

P2、權(quán)利要求3中所述的物質(zhì)在制備調(diào)控偽狂犬病毒免疫抑制產(chǎn)品中的應(yīng)用。