[發(fā)明專(zhuān)利]松果體損傷大鼠模型的構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010580371.7
• 申請(qǐng)日: 2020-06-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111642460B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋美卿;王丹妮;胡文卓;郭晉良;楊鈐;賈力莉;牛艷艷;白崇智;王若瑜;仲啟明;仝立國(guó);吉海杰;張夏林;馮瑪莉
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山西省中醫(yī)藥研究院（山西省中醫(yī)院）
• 主分類(lèi)號(hào): A01K67/02
• 分類(lèi)號(hào): A01K67/02
• 代理公司: 太原晉科知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 14110
• 代理人: 鄭晉周;翟沖燕

本發(fā)明屬實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型技術(shù)領(lǐng)域，為解決目前松果體損傷模型操作復(fù)雜、成功率低、造模時(shí)間長(zhǎng)、可重復(fù)性低等問(wèn)題，提供一種松果體損傷大鼠模型的構(gòu)建方法。大鼠腹腔注射PCPA 450 mg/kg，連續(xù)注射2d，每天1次；或大鼠用穿梭箱給電刺激，電刺激電壓30 V、電流0.8 A、刺激30 s、間隔30 s、循環(huán)60次，連續(xù)5d；或電刺激法大鼠第四天加用腹腔注射PCPA法。病理組織形態(tài)學(xué)、血清檢測(cè)松果體主要合成分泌激素褪黑素含量，動(dòng)物一般情況及行為學(xué)輔助方法客觀評(píng)價(jià)三種造模方法，均造成大鼠松果體的損傷，為研究篩選對(duì)松果體損傷具有保護(hù)治療作用的藥物及機(jī)制提供良好的模型依據(jù)；方法簡(jiǎn)便、成模時(shí)間短、重復(fù)性好、指標(biāo)評(píng)價(jià)簡(jiǎn)單可靠。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種松果體損傷大鼠模型的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

松果體（pineal gland）是機(jī)體生物鐘節(jié)律的重要組成部分[1]，是維持內(nèi)源性生物鐘運(yùn)作的核心元件，其合成分泌的褪黑素（melatonin，MT），具有促進(jìn)睡眠、調(diào)節(jié)時(shí)差、抗衰老、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤等多種作用，因其可促進(jìn)睡眠，被稱(chēng)為“生理性催眠劑”[2]。松果體隨著年齡增長(zhǎng)松果體細(xì)胞變大，有空泡改變，合成分泌褪黑素下降，其調(diào)節(jié)晝夜節(jié)律作用減退。目前松果體損傷模型有通過(guò)分離左頸總動(dòng)脈且永久性結(jié)扎，造新生兒大鼠缺氧缺血性腦病模型，研究松果體對(duì)機(jī)體晝夜節(jié)律影響[3]，手術(shù)操作復(fù)雜，成功率低；D-半乳糖致衰老大鼠松果體過(guò)氧化損傷模型，造模時(shí)間長(zhǎng)[4]。

對(duì)氯苯丙氨酸（dl-4-chlorophenylalanine,PCPA）腹腔注射是目前公認(rèn)的經(jīng)典失眠動(dòng)物模型，PCPA通過(guò)抑制色氨酸氨化酶合成，從而減少5-羥色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）的生成，睡眠-覺(jué)醒周期紊亂，且其操作較簡(jiǎn)單、具有良好的可重復(fù)性[5]，但目前未曾報(bào)道有直接導(dǎo)致松果體的損傷；電刺激應(yīng)激模型可使晝夜節(jié)律紊亂且操作簡(jiǎn)單、可重復(fù)性強(qiáng)[6]。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為了解決目前松果體損傷模型操作復(fù)雜、造模時(shí)間長(zhǎng)、成功率低、可重復(fù)性較差等問(wèn)題，提供了一種松果體損傷大鼠模型的構(gòu)建方法，并篩選出評(píng)價(jià)模型的幾個(gè)經(jīng)典指標(biāo)。

本發(fā)明由如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種松果體損傷大鼠模型的構(gòu)建方法，大鼠腹腔注射PCPA 450 mg·kg^-1，連續(xù)注射2d，每天1次；

或大鼠使用穿梭箱給電刺激，電刺激電壓30 V、電流0.8 A、刺激30 s、間隔30 s、循環(huán)60次，連續(xù)5 d；

或電刺激大鼠第四天加用PCPA，電刺激條件為：電壓30 V、電流0.8 A、刺激30 s、間隔30 s、循環(huán)60次，連續(xù)5天，第4天腹腔注射PCPA 450 mg·kg^-1，連續(xù)注射2d，每天1次。

具體步驟如下：

（1）建模：大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開(kāi)始建模，建模方法采用PCPA腹腔注射，或電刺激，或PCPA腹腔注射聯(lián)合電刺激法；

其中：PCPA腹腔注射PCPA混懸液10 ml·kg^-1，連續(xù)注射2d，每天1次；

電刺激為：模型制備第一天置穿梭箱給予電刺激，電刺激方法為：電壓30V、電流0.8 A、刺激時(shí)間30 s、間隔時(shí)間30 s、循環(huán)60次，每天同一時(shí)間連續(xù)電刺激5日；

PCPA腹腔注射聯(lián)合電刺激法為：模型制備第一天置穿梭箱給予電刺激，電刺激方法為：電壓30V、電流0.8 A、刺激時(shí)間30 s、間隔時(shí)間30 s、循環(huán)60次，每天同一時(shí)間連續(xù)電刺激5 d；同時(shí)，建模開(kāi)始起第四天，腹腔注射PCPA混懸液10 ml·kg^-1，連續(xù)注射2d，每天1次；