[發(fā)明專利]松果體損傷大鼠模型的構(gòu)建方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010580371.7 | 申請日： | 2020-06-23 |
| 公開（公告）號： | CN111642460B | 公開（公告）日： | 2022-06-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 宋美卿;王丹妮;胡文卓;郭晉良;楊鈐;賈力莉;牛艷艷;白崇智;王若瑜;仲啟明;仝立國;吉海杰;張夏林;馮瑪莉 | 申請（專利權(quán)）人： | 山西省中醫(yī)藥研究院（山西省中醫(yī)院） |
| 主分類號： | A01K67/02 | 分類號： | A01K67/02 |
| 代理公司： | 太原晉科知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 14110 | 代理人： | 鄭晉周;翟沖燕 |
| 地址： | 030012 *** | 國省代碼： | 山西;14 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 松果體 損傷 大鼠 模型 構(gòu)建 方法 | ||
1.一種松果體損傷大鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于：大鼠腹腔注射PCPA 450 mg·kg-1，連續(xù)注射2d，每天1次；
或大鼠使用穿梭箱給電刺激，電刺激電壓30 V、電流0.8 A、刺激30 s、間隔30 s、循環(huán)60次，連續(xù)5 d；
或電刺激大鼠第四天加用PCPA，電刺激條件為：電壓30 V、電流0.8 A、刺激30 s、間隔30 s、循環(huán)60次，連續(xù)5天，第4天腹腔注射PCPA 450 mg·kg-1，連續(xù)注射2d，每天1次；
具體步驟如下：
（1）建模：大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始建模，建模方法采用PCPA腹腔注射，或電刺激，或PCPA腹腔注射聯(lián)合電刺激法；
其中：PCPA腹腔注射為建模開始起第4天，腹腔注射PCPA混懸液10 ml·kg-1，連續(xù)注射兩天，每天1次；
電刺激為：模型制備第一天置穿梭箱給予電刺激，電刺激方法為：電壓30V、電流0.8 A、刺激時間30 s、間隔時間30 s、循環(huán)60次，每天同一時間連續(xù)電刺激5日；
PCPA腹腔注射聯(lián)合電刺激法為：模型制備第一天置穿梭箱給予電刺激，電刺激方法為：電壓30V、電流0.8 A、刺激時間30 s、間隔時間30 s、循環(huán)60次，每天同一時間連續(xù)電刺激5日；同時，建模開始起第4天，腹腔注射PCPA混懸液10 ml·kg-1，連續(xù)注射兩天，每天一次；
所述PCPA混懸液為：稱取無水碳酸鈉3.392 g、碳酸氫鈉1.512 g，加蒸餾水500 mL，攪拌均勻，混合，配制成pH10.1的0.1mol/L碳酸鹽緩沖液，將PCPA溶于上述碳酸鹽緩沖液中，PCPA在碳酸鹽緩沖液中的濃度為45 g·L-1，80℃加熱30 min，功率250W，頻率40kHz超聲處理5 min，臨用現(xiàn)配；
（2）對造模動物進(jìn)行指標(biāo)檢測：對造模動物進(jìn)行行為學(xué)及藥理學(xué)相關(guān)指征檢測，并取血檢測相關(guān)血清學(xué)指標(biāo)，以及松果體病理組織形態(tài)學(xué)指標(biāo)，綜合篩選出判定松果體損傷大鼠模型的模型；
所述行為學(xué)及藥理學(xué)相關(guān)指征檢測為：曠場活動測試、高架十字迷宮測試；所述相關(guān)血清學(xué)指標(biāo)為：血清MT及5-HT、GABA神經(jīng)遞質(zhì)含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種松果體損傷大鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于：所述步驟（2）中得到的松果體損傷大鼠模型中，與正常對照組相比，具有下列特征：
（1）一般情況：正常大鼠晝夜節(jié)律及行為活動正常，皮毛柔順；造模后大鼠白天夜晚活動不停，易驚嚇，互相打斗，皮毛戰(zhàn)栗；頭部震顫，放置穿梭箱時有對抗行為，對穿梭箱有抵抗；
（2）曠場活動測試：造模后，大鼠的曠場活動總距離、平均速度均顯著降低；曠場活動中央?yún)^(qū)時間：PCPA處理、PCPA聯(lián)合電刺激組顯著提高；電刺激組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；表明模型組大鼠雖然活動總距離少但性情急躁速度較快，而且用PCPA造模大鼠對明暗無明顯嗜好喜好亂竄；
（3）高架十字迷宮：進(jìn)入開放臂次數(shù)百分比PCPA聯(lián)合電刺激組顯著增高，PCPA及電刺激組有增高趨勢；開放臂時間百分比PCPA組、PCPA聯(lián)合電刺激組顯著提高，電刺激有增加趨勢，表明模型大鼠沒有表現(xiàn)出害怕逃避高空開放環(huán)境喜歡躲避至暗環(huán)境的焦慮狀態(tài)，反而都有些好動狂躁現(xiàn)象；
（4）血清MT含量：PCPA組、電刺激組PCPA聯(lián)合電刺激組均顯著降低；表明此模型主要對松果體損傷后分泌的MT有顯著影響作用；
（6）松果體病理組織學(xué)變化：正常大鼠松果體細(xì)胞和梭形膠質(zhì)細(xì)胞排列緊密，均勻分布，清晰可見；三種造模大鼠：松果體細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞數(shù)目減少，空泡變性增多，細(xì)胞核固縮向周邊移動，細(xì)胞界限模糊。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種松果體損傷大鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于：所述大鼠為SD大鼠，飼養(yǎng)條件：溫度：20℃～23℃，濕度：20%～50%。
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