[發(fā)明專利]一種水中13種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的高分辨質(zhì)譜檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010577561.3
• 申請(qǐng)日: 2020-06-23
• 公開（公告）號(hào): CN111781291A
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊姝麗;余燾;吳祥慶;吳明媛;黃國(guó)秋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): G01N30/06
• 分類號(hào): G01N30/06;G01N30/72;G01N30/02
• 代理公司: 北京匯捷知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11531
• 代理人: 李宏偉

本發(fā)明屬于抗生素檢測(cè)領(lǐng)域，公開了一種水中13種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的高分辨質(zhì)譜檢測(cè)方法。本發(fā)明所述方法為：量取水樣，用氨水調(diào)節(jié)pH=7~10，加入Na2EDTA、異丙醇，混勻，C18固相萃取膜依次用甲醇、水預(yù)處理，水樣以45?55 mL/min流速過(guò)膜，水淋洗固相萃取膜，去除殘留水分，甲醇洗脫，洗脫液吹干，加入甲醇，旋渦混合溶解殘?jiān)?jīng)濾膜過(guò)濾后，用液相色譜?四極桿?靜電軌道阱高分辨質(zhì)譜進(jìn)行測(cè)定。該方法無(wú)需建立譜庫(kù)，按照設(shè)定條件一次進(jìn)樣獲得定性與定量結(jié)果，此外，采用固相萃取膜進(jìn)行樣品富集，縮短了樣品處理時(shí)間，提高了檢測(cè)效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗生素檢測(cè)領(lǐng)域，具體是涉及一種水中13種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的高分辨質(zhì)譜檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

大環(huán)內(nèi)酯類抗生素是結(jié)構(gòu)中含有內(nèi)酯環(huán)及脫氧糖的一類弱堿性抗生素，常用的包括有14環(huán)的紅霉素（ERY）、羅紅霉素（ROM）、地紅霉素（DRM）、氟紅霉素（FRM）、克拉霉素（CLM）、竹桃霉素（OLM），15元環(huán)的阿奇霉素（AZM），16元環(huán)的泰樂霉素（TLS）、螺旋霉素（SPM）、吉他霉素（KTM）、米卡霉素(MDM)、替米考星（TMC）、交沙霉素（JSM）等。大環(huán)內(nèi)酯類抗生素除用于治療人類細(xì)菌感染，在畜禽水產(chǎn)養(yǎng)殖中也被廣泛用于疾病治療、提高飼料利用率和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。這些抗生素并不能被動(dòng)物體完全吸收，很大一部分最終以原形或者代謝物的形式排入環(huán)境中。環(huán)境中痕量的抗生素殘留就能誘導(dǎo)細(xì)菌產(chǎn)生抗性基因，獲得耐藥性，并藉由橫向傳遞作用轉(zhuǎn)移到病原菌中或通過(guò)食物鏈轉(zhuǎn)移到人或其他動(dòng)物體內(nèi)。

目前，致病菌耐藥性的增加和擴(kuò)散已經(jīng)成為全球公共安全問(wèn)題。但是水體環(huán)境中抗生素含量為痕量級(jí)別，需要富集后才能進(jìn)入儀器檢測(cè)。當(dāng)前環(huán)境中抗生素檢測(cè)主要使用固相萃取柱富集，這種方法的流速對(duì)回收率影響較大，且富集500mL樣品需要1小時(shí)以上，難以應(yīng)對(duì)大量樣品檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為了克服上述背景技術(shù)的不足，提供了一種水中13種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的高分辨質(zhì)譜檢測(cè)方法。本發(fā)明提供的方法是一種基于固相萃取膜技術(shù)，建立的液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)離子軌道阱質(zhì)譜檢測(cè)海水中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的方法，對(duì)了解水體環(huán)境中抗生素殘留重要參考意義。

其中，固相萃取膜由于比表面積大，500mL樣品10min內(nèi)可以完成富集，極大提高了樣品處理效率。四極桿/靜電場(chǎng)離子軌道阱質(zhì)譜具有獲取一、二級(jí)碎片離子精確質(zhì)量數(shù)的功能，對(duì)一級(jí)全掃描譜圖提取精確質(zhì)量數(shù)可獲得提取離子流圖，從而實(shí)現(xiàn)高通量的目標(biāo)物定量及非目標(biāo)物的篩查，在一級(jí)全掃描的同時(shí)可以獲得二級(jí)碎片離子質(zhì)譜圖，得到高可靠性的確證結(jié)果。

為達(dá)到本發(fā)明的目的，本發(fā)明水中13種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的高分辨質(zhì)譜檢測(cè)方法為：量取水樣，用氨水調(diào)節(jié)pH=7~10，加入Na₂EDTA、異丙醇，混勻，C18固相萃取膜依次用甲醇、水預(yù)處理，水樣以45-55 mL/min流速過(guò)膜，水淋洗固相萃取膜，去除殘留水分，甲醇洗脫，洗脫液吹干，加入甲醇，旋渦混合溶解殘?jiān)?jīng)濾膜過(guò)濾后，用液相色譜-四極桿-靜電軌道阱高分辨質(zhì)譜進(jìn)行測(cè)定；其中，所述13種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素為紅霉素、羅紅霉素、地紅霉素、氟紅霉、克拉霉素、竹桃霉素、阿奇霉素、螺旋霉素、泰樂霉素、吉他霉素、麥迪霉素、交沙霉素、替米考星。

優(yōu)選地，本發(fā)明水中13種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的高分辨質(zhì)譜檢測(cè)方法為：量取500mL水樣，用氨水調(diào)節(jié)pH=7~10，加入0.2g Na₂EDTA，5 mL異丙醇，混勻，C18固相萃取膜依次用5 mL甲醇、5 mL水預(yù)處理，水樣以50 mL/min流速過(guò)膜，10mL水淋洗固相萃取膜，減壓抽干去除殘留水分，10 mL甲醇洗脫，洗脫液在40 ℃下氮吹至干，加入1 mL 20 %甲醇，旋渦混合溶解殘?jiān)?jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾后，用液相色譜-四極桿-靜電軌道阱高分辨質(zhì)譜進(jìn)行測(cè)定。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述水樣用氨水調(diào)節(jié)pH=9.5~10.5。