[發(fā)明專利]一種捕獲文庫構建方法及應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010573877.5 | 申請日： | 2020-06-22 |
| 公開（公告）號： | CN111690988A | 公開（公告）日： | 2020-09-22 |
| 發(fā)明（設計）人： | 覃振東;王梁輝;楊敬敏;高鵬飛;唐嘉婕 | 申請（專利權）人： | 上海韋翰斯生物醫(yī)藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C40B50/06 | 分類號： | C40B50/06;C12Q1/6806;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 朱凌嬌;許亦琳 |
| 地址： | 201318 上海市浦東*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 捕獲 文庫 構建 方法 應用 | ||
1.一種捕獲文庫構建方法，至少包括以下步驟：
1)將片段化的DNA與接頭連接，獲得預文庫；
2)利用擴增引物對預文庫進行擴增，獲得富集文庫；所述擴增引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物或下游引物的一端設有修飾基團；或者，所述上游引物和下游引物的一端同時設有不同的修飾基團；所述富集文庫中包括雙鏈DNA；
3)使用核酸酶消化所述富集文庫，使得所述富集文庫中的雙鏈DNA的一條單鏈被消化；
4)在不存在接頭封閉序列或存在低于正常工作體積的接頭封閉序列的情況下，將步驟3)獲得的產(chǎn)物與雜交探針進行雜交捕獲，獲得捕獲文庫。
2.如權利要求1所述的捕獲文庫構建方法，其特征在于，步驟2)中，所述擴增引物中，所述修飾基團設于5’端一側(cè)的堿基上。
3.如權利要求1所述的捕獲文庫構建方法，其特征在于，步驟2)中，所述修飾基團的修飾方式選自生物素修飾、氨基修飾、磷酸化修飾、巰基修飾、硫代修飾或雙脫氧堿基修飾。
4.如權利要求2所述的捕獲文庫構建方法，其特征在于，步驟2)中，上游引物或下游引物引物中，被修飾的堿基的數(shù)量為1-10個。
5.如權利要求1所述的捕獲文庫構建方法，還包括在步驟1)之前，將片段化的DNA進行末端修復和/或末端加A的步驟。
6.如權利要求5所述的捕獲文庫構建方法，其特征在于，DNA片段化、末端修復和末端加A在一個反應體系中進行。
7.如權利要求1所述的捕獲文庫構建方法，其特征在于，還包括以下特征中的一項或多項：
a.所述接頭選自短Y型接頭或長Y型接頭；
b.所述核酸酶選自T7外切酶、T5外切酶、Lambda外切酶或外切酶III。
8.一種用于構建捕獲文庫的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：
(1)用于連接接頭的試劑，包括接頭；
(2)用于PCR擴增的試劑，包括擴增引物，所述擴增引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物或下游引物的一端設有修飾基團；或者，所述上游引物和下游引物的一端同時設有不同的修飾基團；
(3)用于核酸消化的核酸酶；
(4)用于雜交的試劑，不包括封閉序列。
9.如權利要求8所述的用于構建捕獲文庫的試劑盒，其特征在于，還包括以下特征中的一項或多項：
a.所述擴增引物中，所述修飾基團設于5’端一側(cè)的堿基上；
b.所述修飾基團的修飾方式選自生物素修飾、氨基修飾、磷酸化修飾、巰基修飾、硫代修飾或雙脫氧堿基修飾；
c.所述接頭選自短Y型接頭或長Y型接頭；
d.所述核酸酶選自T7外切酶、T5外切酶、Lambda外切酶或外切酶III；
e.所述試劑盒還包括用于進行末端修復和/或末端加A的試劑。
10.如權利要求8所述的用于構建捕獲文庫的試劑盒，其特征在于，上游引物或下游引物引物中，被修飾的堿基的數(shù)量為1-10個。
11.一種捕獲文庫，采用如權利要求1-7任一所述的捕獲文庫構建方法或權利要求8-10所述的用于構建捕獲文庫的試劑盒構建。
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