[發明專利]一種柞蠶蛹蟲草生物活性肽的制備方法

在審

• 申請號: 202010573543.8
• 申請日: 2020-06-22
• 公開（公告）號: CN111690705A
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發明（設計）人: 王美景;柳葉飛;王升厚;徐方旭;王澤;趙曉云;王萍萍;辛意貝;余柳柳
• 申請（專利權）人: 沈陽師范大學;沈陽蟲林密寶北蟲草食品科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/16
• 代理公司: 沈陽維特專利商標事務所(普通合伙) 21229
• 代理人: 甄玉荃

本發明公開了一種柞蠶蛹蟲草生物活性肽的制備方法，該方法首次采用最為接近天然冬蟲夏草的柞蠶蛹蟲草為原料，以保證制得小分子生物活性肽的豐富度、含量和抗氧化活性；同時配合采用雙蛋白酶聯合酶解法，使酶解更徹底，小分子肽比例提高，活性更強；而且雙蛋白酶聯合酶解法中采用的是食品級堿性蛋白酶和胰蛋白酶，大大降低了活性肽的制備成本；整個活性肽的制備全程是在55℃以下，沒有高溫環節，因此，制得的活性肽抗氧化能力和清除超氧自由基的能力強，具有易溶解、耐酸、耐熱、穩定性高的優點；此外，制備獲得的活性肽經高效液相色譜法分離后，圖譜清晰、物質分離度高、分散度好，達到優質水平。

技術領域

本發明公開涉及活性肽制備的技術領域，尤其涉及一種柞蠶蛹蟲草生物活性肽的制備方法。

背景技術

蛹蟲草，又名北冬蟲夏草、北蟲草，與冬蟲夏草同屬異種。研究表明蛹蟲草具有與冬蟲夏草極其相似的有效成分和藥用功效，如益精氣、補虛損、抑菌、降壓、鎮靜、降糖、免疫調節等作用。同昂貴的野生冬蟲夏草相比，人工栽培的蛹蟲草成分體系豪不損失，特別在抗癌成分蟲草素、噴司他丁含量上更顯優勢，此外，人工栽培的蛹蟲草還含有蟲草多糖、麥角甾醇、黃酮類、生物堿類、SOD酶等生物活性物質，這為蛹蟲草高端產品開發奠定了物質基礎。

生物活性肽是機體完成各種生理活動必不可少的重要物質，在生物的代謝活動和疾病治療中起著不可替代的作用。目前，生物活性肽大多是由冬蟲夏草制備而成，隨著人工栽培蛹蟲草技術的提升，是否可將人工栽培蛹蟲草作為原料進行生物活性肽的制備，成為人們研究的對象。

發明內容

鑒于此，本發明公開提供了一種柞蠶蛹蟲草生物活性肽的制備方法，以實現以人工栽培的蛹蟲草作為原料，制備獲得高活性的生物活性肽。

本發明提供的技術方案，具體為，一種柞蠶蛹蟲草生物活性肽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)以活體柞蠶蛹作為培養基，接種功能性蛹蟲草“素高1號”液體菌種，經常規培養得子座完整的柞蠶蛹蟲草；

2)將步驟1)中的柞蠶蛹蟲草子座進行冷凍干燥后，粉碎，得干粉；

3)取步驟2)中的干粉，加去離子水后，加入堿性蛋白酶和胰蛋白酶兩種蛋白酶進行酶解，得酶解液；

4)將步驟3)中的酶解液經粗過濾以及離心去除固態渣子，留上清液；

5)取步驟4)中的上清液依次注入分子量10萬道爾頓的超濾柱、分子量1萬道爾頓的超濾柱以及分子量1000道爾頓的超濾柱過濾，得小分子生物活性肽類混合液；

6)在無菌條件下，將步驟5)中的小分子生物活性肽類混合液，采用細菌過濾器進行除菌，得成品。

優選，在步驟6)之后將所述成品放入真空冷凍干燥機中，制備成肽類冷凍干燥粉。

進一步優選，步驟1)中以活體柞蠶蛹作為培養基，接種功能性蛹蟲草“素高1號”液體菌種后，在溫度為15℃～20℃、濕度為70％～90％條件下，培養55天～60天，培養得子座完整的柞蠶蛹蟲草。

進一步優選，步驟2)中所述冷凍干燥的環境為：溫度為-25℃，真空度為10-12Pa,高壓均質壓力為1.2×10⁵KPa。

進一步優選，步驟2)中粉碎得干粉的溫度為-10℃至-20℃，干粉的細度為120目。

進一步優選，按重量計，步驟3)中蛋白酶的加入量為干粉的6％，其中，堿性蛋白酶和胰蛋白酶的加入量為1:1，且先加入堿性蛋白酶后，再加入胰蛋白酶。

進一步優選，堿性蛋白酶和胰蛋白酶的酶解溫度均為55℃，按規定順序酶解時間均為2h，底物濃度為10％。

進一步優選，所述堿性蛋白酶為食品級20萬U，所述胰蛋白酶為食品級10萬U。