[發(fā)明專利]一種檢測(cè)MYD88基因L265P突變的引物和探針及高靈敏度檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010573480.6
• 申請(qǐng)日: 2020-06-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111593126A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱良俊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州千麥醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6886
• 分類號(hào): C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 杭州裕陽(yáng)聯(lián)合專利代理有限公司 33289
• 代理人: 金方瑋

本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)MYD88基因L265P突變的引物和探針及高靈敏度檢測(cè)方法，檢測(cè)過(guò)程包括如下步驟：步驟一，提取人全血樣本中的DNA；步驟二，熒光PCR檢測(cè)，得到熒光結(jié)果圖：用MYD88 L265P F和MYD88 L265P WR引物及MYD88 L265P Probe探針特異性擴(kuò)增野生DNA；用MYD88 L265P F和MYD88 L265P MR引物及MYD88 L265P Probe探針特異性擴(kuò)增突變DNA；步驟三，利用熒光結(jié)果圖判斷突變結(jié)果；本發(fā)明利用AS?PCR熒光法，再配合利用篩選得到的引物及探針，提高了檢測(cè)的特異性和靈敏度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因突變檢測(cè)領(lǐng)域，特別是一種檢測(cè)MYD88基因L265P突變的引物和探針及高靈敏度檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

髓系分化因子88(myeloid differentiation primary response 88,MYD88)基因位于3號(hào)染色體短臂,共有5個(gè)外顯子。MYD88 L265P基因突變是MYD88基因位于第5個(gè)外顯子38182640位點(diǎn)的T→C點(diǎn)突變,其導(dǎo)致了MYD88蛋白TIR區(qū)域的265位氨基酸-亮氨酸被脯氨酸所取代，是MYD88基因最主要的突變。

MYD88基因突變見(jiàn)于約90％LPL/WM(淋巴漿細(xì)胞淋巴瘤/Waldenstrom巨球蛋白血癥)。而SMZL(脾邊緣區(qū)淋巴瘤)、CLL伴漿細(xì)胞分化及IgM分泌型MM中則罕見(jiàn)甚至無(wú)MYD88基因突變。故該基因突變可用于LPL/WM的鑒別診斷。

另外MYD88基因突變也見(jiàn)于IgM-secreting MGUS(IgM型意義未明的單克隆免疫球蛋白血癥)，突變率為60％-80％。同時(shí)研究表明，MYD88基因突變與預(yù)后存在相關(guān)性。與野生型相比，MYD88基因突變?cè)贚PL/WM患者中預(yù)示著疾病進(jìn)展緩慢且生存期更長(zhǎng)；而在IgM分泌型MGUS患者中則是危險(xiǎn)因子，具有更高的血清IgM水平，更重的骨髓侵犯；發(fā)展為WM的風(fēng)險(xiǎn)增高。

目前對(duì)于MYD88 L265P突變檢測(cè)常見(jiàn)有以下方法：

1.PCR-Sanger測(cè)序法

目前對(duì)基因突變檢測(cè)最常見(jiàn)方法，多項(xiàng)研究均采用該方法檢測(cè)MYD88突變。但是大部分LPL/WM患者，初診時(shí)骨髓和外周血異常細(xì)胞比例低于30％，而常規(guī)Sanger測(cè)序法的靈敏度是15％-20％，常規(guī)的PCR-sanger法可能會(huì)出現(xiàn)假陰性測(cè)序結(jié)果。

2.AS-PCR電泳法

目前在類似單堿基突變的基因檢測(cè)中也常用該檢測(cè)方法。相較于傳統(tǒng)的PCR-Sanger測(cè)序法，AS-PCR電泳法具有靈敏度更高、檢測(cè)周期更短的優(yōu)勢(shì)。但是AS-PCR電泳法，采用電泳檢測(cè)，在部分突變含量低的樣本中，容易造成結(jié)果誤判。

市場(chǎng)需要一種快速、高靈敏、高特異檢測(cè)MYD88 L256P突變的檢測(cè)方法，本發(fā)明解決這樣的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)MYD88基因L265P突變的引物和探針及高靈敏度檢測(cè)方法，本發(fā)明利用AS-PCR熒光法，再配合利用篩選得到的引物及探針，提高了檢測(cè)的特異性和靈敏度。

為了實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：

一種檢測(cè)MYD88基因L265P突變的引物和探針，

引物包括：

MYD88 L265P F:GGATGGCTGTTGTTAACC；

MYD88 L265P WR1:GCCTTGTACTTGATGGGGATgA；

MYD88 L265P MR1:CCTTGTACTTGATGGGGATgG；

探針包括：