[發明專利]一種檢測MYD88基因L265P突變的引物和探針及高靈敏度檢測方法

在審

• 申請號: 202010573480.6
• 申請日: 2020-06-22
• 公開（公告）號: CN111593126A
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 朱良俊
• 申請（專利權）人: 杭州千麥醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 杭州裕陽聯合專利代理有限公司 33289
• 代理人: 金方瑋

1.一種檢測MYD88基因L265P突變的引物和探針，其特征在于，

引物包括：

MYD88 L265P F:GGATGGCTGTTGTTAACC；

MYD88 L265P WR1:GCCTTGTACTTGATGGGGATgA；

MYD88 L265P MR1:CCTTGTACTTGATGGGGATgG；

探針包括：

MYD88 L265P Probe:5’FAM-CCCTTGGCTTGCAGGTGCCCATCAGA-3’TAMRAM。

2.一種檢測MYD88基因L265P突變的高靈敏度檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，提取人全血樣本中的DNA；

步驟二，熒光PCR檢測，得到熒光結果圖：

用MYD88 L265P F和MYD88 L265P WR1引物及MYD88 L265P Probe探針特異性擴增野生DNA；

用MYD88 L265P F和MYD88 L265P MR1引物及MYD88 L265P Probe探針特異性擴增突變DNA；

引物包括：

MYD88 L265P F:GGATGGCTGTTGTTAACC；

MYD88 L265P WR1:GCCTTGTACTTGATGGGGATgA；

MYD88 L265P MR1:CCTTGTACTTGATGGGGATgG；

探針包括：

MYD88 L265P Probe:5’FAM-CCCTTGGCTTGCAGGTGCCCATCAGA-3’TAMRAM；

步驟三，根據MYD88野生擴增體系和突變擴增體系擴增曲線圖，判斷結果是否突變；

結果判讀依據以下原則：

注：MM代表突變擴增體系結果，MW代表野生擴增體系結果。

3.根據權利要求2所述的一種檢測MYD88基因L265P突變的高靈敏度檢測方法，其特征在于，

配置的PCR擴增體系包括：野生型體系，突變型體系；

野生型體系包括：

引物MYD88 L265P F和MYD88 L265P WR1各0.4-1ul，

MYD88 L265P Probe探針(10μM)0.2-0.6ul，

PCR Master Mix 12.5ul，

去離子水4.9-10.5ul，

DNA模版1-5ul；

突變型體系包括：

引物MYD88 L265P F和MYD88 L265P MR1各0.4-1ul ul，

MYD88 L265P Probe探針(10μM)0.2-0.6ul，

Realtime PCR Master Mix 12.5ul，

去離子水4.9-10.5ul，

DNA模版1-5ul。

4.根據權利要求3所述的一種檢測MYD88基因L265P突變的高靈敏度檢測方法，其特征在于，

野生型體系包括：

引物MYD88 L265P F和MYD88 L265P WR1各0.8ul，

MYD88 L265P Probe探針(10μM)0.4ul，

PCR Master Mix 12.5ul，

去離子水8.5ul，

DNA模版2ul。

5.根據權利要求3所述的一種檢測MYD88基因L265P突變的高靈敏度檢測方法，其特征在于，

突變型體系包括：

引物MYD88 L265P F和MYD88 L265P MR1各0.8ul，

MYD88 L265P Probe探針(10μM)0.4ul，

Realtime PCR Master Mix 12.5ul，

去離子水8.5ul，

DNA模版2ul。

6.根據權利要求2所述的一種檢測MYD88基因L265P突變的高靈敏度檢測方法，其特征在于，

步驟二，熒光PCR檢測，得到熒光結果圖：

PCR擴增的條件為: