[發明專利]一種檢測豬瘟病毒的LAMP引物組、試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 202010572979.5
• 申請日: 2020-06-22
• 公開（公告）號: CN111676319A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 李一鳴;李清揚;焦義然;石磊;張嬋;范葶莉;時國強;李翀;王琨
• 申請（專利權）人: 河北三獅生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 石家莊國為知識產權事務所 13120
• 代理人: 李坤

本發明涉及病毒檢測技術領域，具體公開一種檢測豬瘟病毒的LAMP引物組、試劑盒及其使用方法。本發明提供的檢測引物包括一對外引物，一對內引物和一對環引物。本發明提供的引物僅對豬瘟病毒有擴增反應，且最低檢測限可達6拷貝/μl，對豬口蹄疫病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬偽狂犬病毒、豬輪狀病毒、豬細小病毒等10種病原無擴增反應，特異性強，靈敏度高，檢測效果準確可靠，操作簡單，適用于豬瘟病毒的快速檢測，可用于進出口檢疫、食品衛生部門、畜牧飼養場等的現場檢測，易于大范圍推廣應用，具有廣闊的市場前景和較大的經濟、社會效益。

技術領域

本發明涉及病毒檢測技術領域，尤其涉及一種檢測豬瘟病毒的LAMP引物組、試劑盒及其使用方法。

背景技術

豬瘟病毒(Classical Swine fever virus，CSFV)是豬瘟的病原，感染家豬和各種野豬(如非洲野豬、歐洲野豬等)，其他動物不發病。豬瘟是一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，以高熱、內臟器官嚴重出血和高死亡率為特征，是對養豬業危害最大、最危險傳染病之一，呈世界范圍流行，被世界動物衛生組織列為A類16種法定傳染病之一，我國定為一類列性傳染病。近年來，我國豬瘟在流行病學、臨床癥狀和病理變化等方面出現了較大的變化，發病呈周期性、波浪式的地區性散發性流行，臨床癥狀和病理變化表現為非典型或溫和型，亞臨床感染、持續感染和免疫耐受普遍存在。因此，依靠常規臨床癥狀和病理變化很難確診，給我國豬瘟防控工作帶來較大的困難。

環介導等溫擴增法(loop-mediated isothermal amlification，LAMP)，是一種新興的核酸擴增技術，該技術依賴4條特異設計的引物和一種具有鏈置換特性的DNA聚合酶，在等溫條件下可以高效、快速、高特異地擴增靶序列。近年來，國外已將該技術廣泛應用于病原體檢測。目前，用于熒光快速檢測豬瘟病毒的LAMP引物組的檢測結果靈敏度較低，且易產生假陰性或假陽性結果。

發明內容

針對現有檢測豬瘟病毒的LAMP方法存在特異性差、靈敏度低的問題，本發明提供一種檢測豬瘟病毒的LAMP引物組、試劑盒及其使用方法。

為達到上述發明目的，本發明實施例采用了如下的技術方案：

一種檢測豬瘟病毒的LAMP引物組，包括一對外引物F3和B3，一對內引物FIP和BIP和一對環引物LF和LB，其中，所述外引物的序列為：

F3：5′-AGATTCCCTACCTCCCTCCTA-3′；

B3：5′-AACACCCTTTCTGAATGACCA-3′；

所述內引物的序列為：

FIP：5′-GGAGACTGGTTGGGCTTACAC-3′；

BIP：5′-TTATTCTACTGGCTGCTCAGG-3′；

所述環引物的序列為：

LF：5′-AGGGCGGCAGCAGAATCAGTA-3′；

LB：5′-CGGTGCCCTTATTGGATACGG-3′。

相對于現有技術，本發明針對豬瘟病毒基因組的5′端非編碼區設計了特異性引物，該引物僅對豬瘟病毒有擴增反應，且最低檢測限可達6拷貝/μl，對豬口蹄疫病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬偽狂犬病毒、豬輪狀病毒、豬細小病毒等10種病原無擴增反應，特異性強，靈敏度高，檢測效果準確可靠，操作簡單，適用于豬瘟病毒的快速檢測，可用于進出口檢疫、食品衛生部門、畜牧飼養場等的現場檢測，易于大范圍推廣應用，具有廣闊的市場前景和較大的經濟、社會效益。

本發明還提供了一種檢測豬瘟病毒的LAMP試劑盒，包含上述的LAMP引物組。

優選的，所述LAMP試劑盒還包括DNA聚合酶、LAMP反應液、甜菜堿、陽性對照和陰性對照。