[發明專利]一種檢測豬瘟病毒的LAMP引物組、試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 202010572979.5
• 申請日: 2020-06-22
• 公開（公告）號: CN111676319A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 李一鳴;李清揚;焦義然;石磊;張嬋;范葶莉;時國強;李翀;王琨
• 申請（專利權）人: 河北三獅生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 石家莊國為知識產權事務所 13120
• 代理人: 李坤

1.一種檢測豬瘟病毒的LAMP引物組，其特征在于，包括一對外引物F3和B3，一對內引物FIP和BIP和一對環引物LF和LB，其中，所述外引物的序列為：

F3：5′-AGATTCCCTACCTCCCTCCTA-3′；

B3：5′-AACACCCTTTCTGAATGACCA-3′；

所述內引物的序列為：

FIP：5′-GGAGACTGGTTGGGCTTACAC-3′；

BIP：5′-TTATTCTACTGGCTGCTCAGG-3′；

所述環引物的序列為：

LF：5′-AGGGCGGCAGCAGAATCAGTA-3′；

LB：5′-CGGTGCCCTTATTGGATACGG-3′。

2.一種檢測豬瘟病毒的LAMP試劑盒，其特征在于，包含權利要求1所述的LAMP引物組。

3.如權利要求2所述的LAMP試劑盒，其特征在于，所述LAMP試劑盒還包括DNA聚合酶、LAMP反應液、甜菜堿、陽性對照和陰性對照。

4.如權利要求3所述的LAMP試劑盒，其特征在于，所述LAMP反應液包括dNTP、10×ThermoPol反應緩沖液、MgSO₄水溶液，Eva Green和雙蒸水。

5.如權利要求4所述的LAMP試劑盒，其特征在于，所述DNA聚合酶為Bst DNA聚合酶。

6.權利要求5所述的LAMP試劑盒的使用方法，其特征在于，具體操作為：提取待測病毒的基因組RNA，并將提取的基因組RNA進行反轉錄，得cDNA，以反轉錄得到的cDNA為模板，用所述試劑盒進行LAMP擴增，觀察熒光信號。

7.如權利要求6所述的LAMP試劑盒的使用方法，其特征在于：所述LAMP擴增的體系包括以下試劑及用量：

10×ThermoPol反應緩沖液2.5μL，

5mol/L的甜菜堿2.5μL，

25μmol/L的F3引物0.2μL，

25μmol/L的B3引物0.2μL，

25μmol/L的FIP引物1.6μL，

25μmol/L的BIP引物1.6μL，

25μmol/L的LP引物0.8μL，

25μmol/L的BP引物0.8μL，

10mmol/L的dNTP 3.0μL，

25mmol/L的MgSO₄溶液6.0μL，

8U的Bst DNA聚合酶1.0μL，

模板RNA2.0μL，

5U的AMV逆轉錄酶1.0μL，

雙蒸水補足至25μL。

8.如權利要求6所述的LAMP試劑盒的使用方法，其特征在于：所述LAMP擴增的反應條件為：65℃，40min。