[發明專利]一種藤梨根抗腫瘤轉移活性物質的提取方法

在審

• 申請號: 202010569500.2
• 申請日: 2020-06-20
• 公開（公告）號: CN111494443A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 甘椿椿;魏曉鵬;姚水洪;金湛;章立新;朱美香;姜莉苑;陳高
• 申請（專利權）人: 衢州職業技術學院;天津醫科大學
• 主分類號: A61K36/185
• 分類號: A61K36/185;A61P35/00;A61K125/00
• 代理公司: 西安匯恩知識產權代理事務所(普通合伙) 61244
• 代理人: 張延長

本發明公開了一種藤梨根抗腫瘤轉移活性物質的提取方法，將干燥粉碎的藤梨根藥材用水正負壓浸泡后，用真菌蛋白酶、果膠酶酶解，滅酶，向酶解液中加入酵母菌，拌勻，保溫發酵培養，期間每隔2h負壓?常壓處理1次，冷凍干燥，將所得的粉劑用95％的乙醇加熱回流提取3次，每次2h，過濾，合并提取液，減壓濃縮，得浸膏；用適量蒸餾水混懸浸膏，用相同體積水飽和的正丁醇分別萃取3次，回收溶劑，分別得到正丁醇部位；將正丁醇部位經大孔吸附樹脂梯度洗脫得Fr.1～5，Fr.4經硅膠柱層析得Fr.4.1～4.5，Fr.4.1經Sephadex LH?20凝膠柱分離，即得。本發明獲得了一種具有較強的體外抗腫瘤轉移活性的活性成分。

技術領域

本發明屬于天然產物化學技術領域，尤其涉及一種藤梨根抗腫瘤轉移活性物質的提取方法。

背景技術

藤梨根為中華獼猴桃(Actinidia chinensisPlanch)的根，為獼猴桃科獼猴桃屬植物。臨床上以單方或者復方用于胃癌、宮頸癌、食道癌、肝癌等惡性腫瘤肝病，黃疸等疾病的治療。此外，現代藥理學研究證明，藤梨根中的成分具有抗腫瘤、抗病毒、抗突變、保護肝臟、降低血脂、調高免疫力等作用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種藤梨根抗腫瘤轉移活性物質的提取方法，所得的活性物質能夠劑量依賴性抗腫瘤轉移活性。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

一種藤梨根抗腫瘤轉移活性物質的提取方法，包括如下步驟：

S1、稱取干燥粉碎的藤梨根藥材適量，加入藤梨根藥材質量的50-60％的水，正負壓循環處理3次后，加入真菌蛋白酶，酶解2h后，加入果膠酶，2h后，滅酶，得酶解液；

S2、向酶解液中加入藤梨根藥材質量的10-15％的酵母菌，拌勻，25-35℃保溫發酵培養6-12h，期間每隔2h負壓-常壓處理1次，冷凍干燥，得粉劑；

S3、將所得的粉劑用95％的乙醇加熱回流提取3次，每次2h，過濾，合并提取液，減壓濃縮，得浸膏；

S4、用適量蒸餾水混懸浸膏，用相同體積水飽和的正丁醇分別萃取3次，回收溶劑，分別得到正丁醇部位；

S5、將正丁醇部位經大孔吸附樹脂梯度洗脫得Fr.1～5，Fr.4經硅膠柱層析得Fr.4.1～4.5，Fr.4.1經Sephadex LH-20凝膠柱分離，即得。

進一步地，所述步驟S1中，正負壓循環處理中正壓處理的壓強為1～3Mpa，處理時間為5min，負壓處理的壓強為0.1～0.3Mpa，處理時間為5min,正壓處理結束后，瞬間進入負壓處理。

進一步地，所述步驟S2中，所述負壓-常壓處理中負壓處理的壓強為0.1～0.3Mpa，處理時間為5min，負壓處理結束后，瞬間恢復成常壓狀態。

進一步地，所述步驟S5中，將正丁醇部位經大孔吸附樹脂，MeOH-H2O 0:100→100:0梯度洗脫得Fr.1～5，Fr.4經300～400目硅膠柱層析，DCM-MeOH 50:1→2:1得Fr.4.1～4.5，Fr.4.1經Sephadex LH-20凝膠柱，DCM-MeOH 1:1洗脫，即得。

進一步地，所述步驟S2中，真菌蛋白酶的添加量為藤梨根藥材質量的1/10，酶解溫度為35～37℃。

進一步地，所述步驟S2中，果膠酶的添加量為藤梨根藥材質量的1/10，酶解溫度為35～37℃。

本發明具有以下有益效果：

獲得了一種具有較強的體外抗腫瘤轉移活性的活性成分；

通過真菌蛋白酶、果膠酶和酵母菌的合理運用，使得藤梨根內的活性成分可以充分的析出，從而大大提高了抗腫瘤轉移活性成分的提取率。