[發(fā)明專利]基于蛋白質(zhì)組學研究抑郁或焦慮癥大鼠蛋白質(zhì)組變化方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010569274.8
• 申請日: 2020-06-20
• 公開（公告）號: CN111584009A
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發(fā)明（設計）人: 黃燕;方垂;王理想;周健;廖偉;劉燕晨
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市微納菲生物技術(shù)有限公司;重慶醫(yī)科大學
• 主分類號: G16B40/10
• 分類號: G16B40/10;G16B20/00;G16B25/00;G01N33/68;G01N27/62
• 代理公司: 深圳市凱博企服專利代理事務所(特殊普通合伙) 44482
• 代理人: 李夢男

本發(fā)明公開了一種基于蛋白質(zhì)組學研究抑郁或焦慮癥大鼠蛋白質(zhì)組變化方法，所述方法包含下述步驟：步驟1，對大鼠大腦前額葉皮層分離與蛋白提取；步驟2，對步驟1所得的蛋白樣品進行FASP法酶解、多肽iTRAQ標記、SCX分級及LC?MS/MS質(zhì)譜分析；步驟3，對步驟2得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進行搜庫與生物信息學分析；步驟4，對步驟3得到的差異蛋白進行PRM技術(shù)驗證。本發(fā)明：1、利用CMS構(gòu)建的臨床前模型可幫助暴露抑郁癥和焦慮癥的潛在分子特征。2、抑郁癥和焦慮癥導致人類或動物前額葉皮層腦容積和樹突棘減少。3、本發(fā)明采用iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學方法針對4組抑郁癥/焦慮癥大鼠模型的前額葉蛋白表達水平進行差異分析，提高了定量蛋白質(zhì)組學結(jié)果的可靠性、客觀性和準確性。

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及一種基于蛋白質(zhì)組學研究抑郁或焦慮癥大鼠蛋白質(zhì)組變化方法，屬于生物醫(yī)學技術(shù)領域。

背景技術(shù)

抑郁癥和焦慮癥是2種常見的慢性神經(jīng)疾病，對患者的社交、親人、家庭與社會具有負面的影響。許多研究者發(fā)現(xiàn)抑郁癥和焦慮癥具有相同的風險因子，包括慢性刺激和生活壓力。許多證據(jù)顯示慢性壓力生活是抑郁癥和焦慮癥的環(huán)境危險因素。盡管暴露在慢性壓力下，很多個體并未顯示出焦慮或抑郁的癥狀。慢性應激(CMS)已經(jīng)廣泛用于誘導大鼠的抑郁和焦慮行為，建立環(huán)境因素影響人類的模型。為了揭示抑郁癥和焦慮癥的潛在的生物學病因和病理生理學，重點研究壓力誘導障礙的敏感性和抵抗性背后的神經(jīng)基質(zhì)將是非常有意義的。

總的來說，抑郁癥和焦慮癥臨床表現(xiàn)不同的核心癥狀但通常共同出現(xiàn)。由于可能出現(xiàn)的共同癥狀及發(fā)病機制，多數(shù)的臨床數(shù)據(jù)和基礎研究者通常會混淆，影響我們對這2種疾病的調(diào)節(jié)因素的理解。最近，多個研究者慢慢開始分別分析無共同癥狀個體與共同癥狀個體，以揭示神經(jīng)系統(tǒng)的獨特和共同特征。抑郁癥和焦慮癥是異質(zhì)性疾病，由多種腦結(jié)構(gòu)控制，如海馬和前額葉。有研究發(fā)現(xiàn)，抑郁癥和焦慮癥導致人類和動物前額葉皮層腦容積和樹突棘減少。前額葉是對應激敏感的腦區(qū)，參與執(zhí)行、認知和社交情感功能。慢性應激誘導的前額葉形態(tài)學和功能改變，導致抑郁和焦慮的認知和情感失調(diào)。前額葉可塑性在抑郁和焦慮個體中都發(fā)現(xiàn)異常，相應的內(nèi)在模式可能發(fā)生根本變化而目前為止仍然未研究清楚。因此，迫切需要識別抑郁癥或焦慮癥的易感性和抵抗性的特有和共同的分子特征。

為了解決上述技術(shù)問題，特提出一種新的技術(shù)方案。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種基于蛋白質(zhì)組學研究抑郁或焦慮癥大鼠蛋白質(zhì)組變化方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種基于蛋白質(zhì)組學研究抑郁或焦慮癥大鼠蛋白質(zhì)組變化方法，所述方法包含下述步驟：

步驟1，對大鼠大腦前額葉皮層分離與蛋白提取；

步驟2，對步驟1所得的蛋白樣品進行FASP法酶解、多肽iTRAQ標記、SCX分級及LC-MS/MS質(zhì)譜分析；

步驟3，對步驟2得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進行搜庫與生物信息學分析；

步驟4，對步驟3得到的差異蛋白進行PRM技術(shù)驗證。

優(yōu)選地，所述步驟1中，對大鼠大腦前額葉皮層分離與蛋白提取具體步驟為：分別取4個不同分組的大鼠前額葉腦組織，進行稱重、勻漿和離心處理，進行BCA法測定蛋白濃度與SDS-PAGE電泳檢測。

優(yōu)選地，所述步驟2是在步驟1蛋白濃度測定后各組樣品分別取100ug蛋白，進行FASP酶切，按照iTRAQ試劑盒說明書進行肽段標記，SCX高pH分級，并進一步進行質(zhì)譜鑒定。

優(yōu)選地，所述步驟3是將質(zhì)譜采集的原始數(shù)據(jù)用Proteome Discoverer進行搜庫并以p≤0.05進行數(shù)據(jù)過濾；將過濾后的蛋白以差異倍數(shù)≥1.2或≤0.83，p≤0.05進行差異分析，得到的差異蛋白進行生信分析。