[發明專利]一種山萵苣苦素的制備方法

在審

• 申請號: 202010569269.7
• 申請日: 2020-06-20
• 公開（公告）號: CN111689935A
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發明（設計）人: 阿吉艾克拜爾·艾薩;魏哲洋;孫光映
• 申請（專利權）人: 中國科學院新疆理化技術研究所
• 主分類號: C07D307/93
• 分類號: C07D307/93;A61P1/16;A61P3/10
• 代理公司: 烏魯木齊中科新興專利事務所(普通合伙) 65106
• 代理人: 張莉

本發明涉及一種山萵苣苦素的制備方法，該方法以毛菊苣根提取物為原料，通過正相硅膠色譜和低溫反相C18制備色譜的結合，從毛菊苣根提取物中分離得到富含山萵苣苦素的組分溶液中獲得純度高于98%的山萵苣苦素對照品。所得山萵苦素對照品可用于藥材標準化過程中的定量定性學研究。該方法簡單易行，純化效率高，具有一定的應用價值。對照品質量符合國家標準樣品，可用于國家標準樣品的申請，進而為富含山萵苣苦素的藥材的質量標準作出貢獻。

技術領域

本發明涉及一種山萵苣苦素的制備方法。

背景技術

毛菊苣為菊科菊苣屬一年生草本植物，是新疆地區常用藥材，主要以其地上部分入藥，味微苦、咸，性涼，具有清肝利膽、健胃消食、利尿消腫之功效。主要應用于肝炎、腎炎、胃脘疼痛的治療。近來研究表明，毛菊苣具備保肝降脂，降血糖和改善心臟功能的功效。隨著國內外的學者對于菊苣屬植物化學成分研究的不斷深入，發現毛菊苣含有的主要化合物種類為黃酮類、倍半萜類、三萜類、香豆素類、甾醇類和生物堿類等。毛菊苣中含有的倍半萜類化合物十分豐富，這些種類的倍半萜味苦，是該植物苦味的主要來源。毛菊苣中含有的山萵苣素、山萵苣苦素等為該植物代表性成分，也是該植物保肝降糖的主要活性成分之一。目前，獲得山萵苣素的主要通過高速逆流色譜法來制備得到，其純度可達97％以上。其所得化合物的純度和制備效率有進一步提高的空間。在現代分離純化技術中，反相C18制備色譜、葡聚糖凝膠LH-20柱色譜及結晶法由于操作簡便，制備效率高，在化合物分離純化過程中發揮著重要的作用。本發明基于山萵苣苦素的物理化學性質，設計了兩種純化方法的組合技術，可從毛菊苣根提取物中制備得到純度高于98％的山萵苣苦素對照品。方法簡單易行，純化效率高，具有一定的應用價值。

發明內容

本發明目的在于，提供一種山萵苣苦素的制備方法，該方法以毛菊苣根提取物為原料，通過正相硅膠色譜和低溫反相C18制備色譜的結合，從毛菊苣根提取物中分離得到富含山萵苣苦素的組分中獲得純度高于98％的山萵苣苦素對照品。所得山萵苦素對照品可用于藥材標準化過程中的定量定性學研究。該方法簡單易行，純化效率高，具有一定的應用價值。對照品質量符合國家標準樣品，可用于國家標準樣品的申請，進而為富含山萵苣苦素的藥材的質量標準作出貢獻。

本發明所述的一種山萵苣苦素的制備方法，按下列步驟進行：

a、將毛菊苣根粉碎，以甲醇占比為70％的甲醇水，料液比控制在1:5，熱回流提取1h，反復提取三次提取液過濾后合并，通過減壓濃縮后獲得浸膏，將浸膏中加兩倍體積的水，超聲分散成懸濁液，再加入等體積的石油醚或正己烷脫脂3次，所得水相合并，加入等體積的乙酸乙酯萃取3次，所得乙酸乙酯層合并，減壓濃縮，真空冷凍干燥，得到毛菊苣根提取物；

b、取一根反相C18制備色譜柱，規格為長度250mm，內徑80mm，裝填用填料粒徑10μm，所填填料質量800g，將反相中試C18色譜柱連在制備色譜儀上，調整流動相為甲醇-0.1％甲酸水混合物，其中甲醇占比為45％-80％，柱溫控制在-10℃-10℃，平衡色譜柱15min，待用，流速控制在180mL/min，稱取步驟a的得到的毛菊苣根提取物50-1000mg，用甲醇溶解備用，收集山萵苣苦素峰，在溫度50℃條件下減壓濃縮，真空冷凍干燥得到純度92％山萵苣苦素10-198mg；

c、取200-300目硅膠36g，以二氯甲烷為溶劑，濕法填裝長度為60cm，內徑為10cm的正相色譜柱，將步驟b中所獲得純度92％山萵苣苦素加1mL甲醇溶解，上樣至正相色譜柱，以體積比為13:1-15:1的二氯甲烷-甲醇、二氯甲烷-乙醇或二氯甲烷-異丙醇混合溶液；或以體積比為13:1-15:1的三氯甲烷-甲醇、三氯甲烷-乙醇或三氯甲烷-異丙醇混合溶液為流動相，洗滌色譜柱，收集含有山萵苣素的組分，使用高效液相色譜儀測定組分中山萵苣苦素的純度，將含山萵苣苦素純度98％的組分合并，在溫度45℃下用旋轉蒸發儀濃縮至干燥，獲得純度98％的山萵苣苦素8-175mg。

步驟b中使用填充填料質量為800g的反相C18制備色譜的純化過程中，毛菊苣根提取物的上樣量為100mg-700mg。