[發明專利]一種蛋雞卵巢氧化應激模型的建立方法

有效

• 申請號: 202010568938.9
• 申請日: 2020-06-19
• 公開（公告）號: CN111657229B
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 王建萍;晏磊;賈茹;尹華東;丁雪梅;張克英
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02
• 代理公司: 成都天匯致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51264
• 代理人: 韓曉銀

本發明公開了一種蛋雞卵巢氧化應激模型的建立方法，包括以下步驟：選用產蛋高峰期的羅曼粉蛋雞，采用單因素試驗設計，設6個處理，分別為1個對照組和5個叔丁基過氧化氫組，對照組飼喂生理鹽水；最后一次飼喂后48h進行采樣；試驗期為24天，飼糧為玉米?豆粕型基礎飼糧，飼養管理按常規飼養管理進行；記錄產蛋率，通過ELISA方法測定雌二醇等的濃度；最后一次飼喂生理鹽水和叔丁基過氧化氫后48h收集卵巢，HE染色后，對原始卵泡數量進行統計，并對前等級和等級卵泡計數和量取；利用HPLC和試劑盒方法測定卵巢中維生素C等的含量或活性。本發明的方法能夠增加卵巢自由基的含量，降低卵巢抗氧化酶活，導致了蛋雞氧化應激。

技術領域

本發明屬于動物繁殖學和毒理學技術領域，具體地說，涉及一種蛋雞卵巢氧化應激模型的建立方法。

背景技術

家禽卵巢是研究卵巢生物學、卵泡發育和卵巢癌的經典模型。家禽的產蛋性能主要取決于卵巢中卵泡的生長和發育水平，并受到遺傳、營養及環境條件(光照時間和強度)等因素的影響。隨著遺傳和營養領域技術的進步，商品蛋雞生產性能持續提高，目前高產蛋雞110周可產410枚～430枚雞蛋，但全期(20-110周齡)平均產蛋率只有65％～70％，仍具有一定的生產潛力有待挖掘。在實際生產中，產蛋雞一般在18-20周時達到性成熟并開產，到24-25周齡產蛋率達95％以上，隨后產蛋率緩慢下降，至產蛋后期(45周齡)產蛋率降到88％左右，而后產蛋率下降速度逐漸增快，80周齡下降到60％左右，產蛋間隔延長，卵巢內不同發育階段的卵泡閉鎖數量增加，表明蛋雞產蛋后期卵巢機能逐步衰退，卵泡發育受到抑制，并容易誘發卵巢癌癥。此外，其他應激因素，比如高溫，高飼養密度、重金屬、疾病等也可以導致產蛋率的急劇下降。生產中因產蛋后期卵巢機能衰退或其他應激等因素，導致全期產蛋數低，一般第一個生產期(72周齡)結束前蛋雞被淘汰，終生僅提供280～300枚雞蛋，究其主要原因在于卵泡閉鎖數量增多和卵泡質量不佳。本課題組前期研究發現，蛋雞飼料中添加抗氧化劑(茶多酚提取物)可以改善重金屬鎘和釩誘導氧化應激模型下蛋雞的產蛋率和卵泡數，也可以提高產蛋后期的產蛋成績；前人研究報道也證實氧化應激造成的繁殖性能衰退，可能是蛋雞后期和應激時產蛋性能下降的主要原因。家禽在孵化時卵巢擁有原始卵泡480萬個，但終生排卵僅500～1000個，具有巨大的生產潛力。氧化應激(Oxidativestress)是指機體在遭受各種有害刺激時，體內的活性分子如活性氧(ROS)和活性氮自由基產生過多，氧化程度超出氧化物清除能力，氧化系統和抗氧化系統動態失衡，從而導致組織損傷。ROS是細胞通路的重要調控分子，能調控細胞周期和細胞凋亡。大量的研究表明，卵泡內一定量的ROS對其發育和排卵具有重要的生理作用，然而當ROS過度升高，將會導致氧化應激，誘導卵泡閉鎖。哺乳動物上的研究發現，氧化應激能降低卵巢各階段卵泡數量，但氧化應激抑制卵泡發育，誘導卵泡閉鎖的具體機制尚不清楚，僅有的研究主要是在人和小鼠等模式動物上，在家禽上的研究非常少。

因此，鑒于上述原因，為了進一步探究氧化應激造成卵巢功能損傷從而降低產蛋性能的具體機制，有必要建立一種蛋雞卵巢的氧化應激模型。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種蛋雞卵巢氧化應激模型的建立方法，能夠進一步探究營養和飼料因素以及衰老引起雞蛋生產性能下降的具體機制。

為了解決上述技術問題，本發明公開了一種蛋雞卵巢氧化應激模型的建立方法，包括以下步驟：

選用產蛋高峰期即28周齡的羅曼粉蛋雞，采用單因素試驗設計，設6個處理，每個處理10個重復，每個重復1只雞，分別為1個對照組和5個叔丁基過氧化氫組，對照組飼喂生理鹽水，分別于實驗8、15、22天早上9：00飼喂生理鹽水和叔丁基過氧化氫；最后一次飼喂后48h進行采樣；試驗期為24天，飼糧為玉米-豆粕型基礎飼糧，飼喂方式為定量飼喂；飼養管理按常規飼養管理進行；試驗開始預飼2周，前通過觀察記錄蛋雞產蛋率，按產蛋率進行隨機分組；