[發明專利]一種EGFR基因19號外顯子E746-A750突變基因的檢測方法

在審

• 申請號: 202010567618.1
• 申請日: 2020-06-19
• 公開（公告）號: CN111676289A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 張慧;劉珍妮;聶志超;張茹松
• 申請（專利權）人: 安徽微分基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6869
• 代理公司: 安徽申策知識產權代理事務所(普通合伙) 34178
• 代理人: 程艷梅

本發明涉及基因檢測技術領域，且公開了一種EGFR基因19號外顯子E746?A750突變基因的檢測方法，包括以下步驟：S1、用E746?A750位點的PCR擴增引物對不同突變頻率的E746?A750標準品(WT?E746?A750、10％?E746?A750、1％?E746?A750、0.1％?E746?A750)進行Taq酶PCR擴增；S2、對不同突變頻率的E746?A750標準品(WT?E746?A750、10％?E746?A750、1％?E746?A750、0.1％?E746?A750)PCR擴增產物進行二代測序文庫構建；只需對不同突變頻率的E746?A750標準品(WT?E746?A750、10％?E746?A750、1％?E746?A750、0.1％?E746?A750)PCR擴增產物進行二代測序文庫構建及Cas9酶的消化和Miseq PE300測序，就可以實現對EGFR基因突變型的E746?A750位點基因的富集及測序檢測；相比于現有技術中檢測EGFR基因19號外顯子E746?A750突變基因的方法，本技術方案的方法在保證準確率和高檢出率的前提下，更重要的是：對于降低檢測的背景噪音和檢測低頻突變更加的可靠。

技術領域

本發明涉及基因檢測技術領域，具體為一種EGFR基因19號外顯子E746-A750突變基因的檢測方法。

背景技術

表皮生長因子受體(EGFR：Epidermal Growth Factor Receptor)是一種跨膜受體酪氨酸激酶，屬于表皮生長因子受體(HER)家族。EGFR廣泛分布于哺乳動物上皮細胞、成纖維細胞、膠質細胞、角質細胞等細胞表面。EGFR信號通路對細胞的生長、增殖和分化等生理過程發揮重要的作用。EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能缺失或其相關信號通路中關鍵因子的活性或細胞定位異常，均會引起腫瘤(尤其肺癌)、糖尿病、免疫缺陷及心血管疾病的發生。

非小細胞肺癌(NSCLC)以驅動基因為主的分子靶向治療較化療呈現出明顯的生存優勢，其中針對表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)的靶向治療研究較為深入。根據研究顯示(EGFR基因突變主要見于18、19、20、21號外顯子，《Update on epidermalGmwth factor receptor mutations in non-smaIl cell lung cancer》Riely GJ，PolitiKA，MiIler VA等，2006)。專家共識(如果NSCLC患者既往接受過EGFR-TKI治療，影像學進展后均應進行T790M突變的檢測，首選腫瘤組織的檢測《非小細胞肺癌EGFR基因少見突變及靶向治療進展》王鴦，李敏，胡成平，2019)。