[發明專利]一種體外誘導臍帶間充質干細胞分化為真皮干細胞的方法

在審

• 申請號: 202010567358.8
• 申請日: 2020-06-19
• 公開（公告）號: CN111662864A
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發明（設計）人: 閻軍;李洋;張怡;劉艷青
• 申請（專利權）人: 天晴干細胞股份有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/0775;C12N5/02;A01N1/02
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 李紅媛

一種體外誘導臍帶間充質干細胞分化為真皮干細胞的方法，它涉及干細胞、細胞培養領域。它用于促進毛囊再生和改善脫發，并和其他干細胞及3?D組織工程材料結合，替代皮膚移植修復損傷。方法：一、人臍帶間充質干細胞取材，原代培養、消化傳代、擴增及凍存；二、誘導hUC?MSCs分化為SKPs細胞懸球，即完成。本發明高效誘導MSCs分化誘導成為SKPs細胞，以替代來源極為受限的皮膚中的真皮干細胞，為臨床解決真皮干細胞采集困難的問題提供了新出路，在臨床用于促進毛囊再生和改善脫發。并和其他干細胞及3?D組織工程材料結合，替代皮膚移植修復損傷。本發明應用于體外誘導臍帶間充質干細胞分化為真皮干細胞。

技術領域

本發明屬于干細胞、細胞培養領域，具體涉及體外誘導臍帶間充質干細胞分化為真皮干細胞的方法。

背景技術

皮膚是人體最大的器官，是人體與外界接觸的第一道屏障。燒燙傷、創傷、及慢性疾病如糖尿病并發癥造成的大面缺損和深度損傷無法自發修復，需皮膚修補和植皮等人工干預治療。由于移植皮膚來源和應用受到多重限制，研究實用的皮膚替代物一直方興未艾。

另一方面，作為皮膚病中最常見的脫發，在日常生活中給眾多的患者帶來很大的煩惱。病理性脫發是指頭發異常或過度的脫落。實質上是毛囊細胞長期處于休止期或退行期的表現。隨著生活工作壓力的增加，脫發年齡越來越年輕。

當然治療脫發要首先從病因上著手，但是許多脫發原因是不能完全去除的。局部對癥用藥和全身用藥，包括促進血液循環和中醫中藥扶正固本療法療效都有限。毛發移植價格昂貴，而且因為毛囊的生存條件沒有得到足夠改善，移植的毛發難以長期生存。皮膚中存在著多種不同的干細胞。毛囊干細胞(hair follicle stem cells,HFSCs)，存在于毛囊上段的突起區域，能夠分化成毛囊結構的所有不同類型細胞，進而形成新的毛發。毛囊干細胞主要來源于分布在表皮基底層的表皮干細胞(Epidermal stem cell)，其數量隨著年齡增大而減少；而誘導人表皮干細胞分化成毛囊干細胞的最重要環節是真皮干細胞，又稱皮膚前體細胞(skin-derived precursors，SKPs)。SKPs廣泛的存在于真皮的乳頭層和真皮血管周圍區域，這些細胞能夠在無血清培養基呈懸浮細胞球生長，研究發現SKPs具有誘導毛囊等皮膚附屬器官形成能力。

美國賓夕法尼亞大學的研究者分析了40歲至65歲男子的頭發和頭皮組織。結果發現，無論是脫發還是沒有脫發的頭皮組織中，毛囊干細胞(HFSCs)的數量都是相同的。所不同的是，脫發頭皮組織中的毛囊干細胞沒有轉化成生長頭發的毛囊前體細胞，缺乏SKPs細胞誘導活性可能是其中的原因。

所以SKPs細胞移植有望成為治療脫發的一條有效途徑。同時，聯合移植不同功能的皮膚干細胞，結合3-D組織工程技術制備的人造皮膚，可以替代植皮治療嚴重皮膚損傷。

但是取材于人體的SKPs細胞很有限，尤其是上年紀的人。而且在體外培養中，SKPs細胞相關標記物的表達和促進毛囊再生的能力隨著傳代的次數而迅速下降。所以找到一種活力強大的SKPs豐富來源，具有極其重大的臨床應用價值。

發明內容

本發明目的是提供一種體外誘導臍帶間充質干細胞分化為真皮干細胞的方法，用于促進毛囊再生和改善脫發，并進一步和其他干細胞及3-D組織工程材料結合，替代皮膚移植修復損傷。

一種體外誘導臍帶間充質干細胞分化為真皮干細胞的方法，它按以下步驟實現：

一、人臍帶間充質干細胞取材，進行原代培養、消化傳代、擴增及凍存；