[發(fā)明專利]一種窖泥己酸菌液的制作方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010565381.3
• 申請日: 2020-06-19
• 公開（公告）號: CN111778181A
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李若任;苗子健
• 申請（專利權(quán)）人: 保定五合窖酒業(yè)有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12G3/02;C12R1/07
• 代理公司: 北京金蓄專利代理有限公司 11544
• 代理人: 趙敏

1.一種窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，以老窖泥為樣品，利用RCM培養(yǎng)基對窖泥中產(chǎn)己酸功能菌進(jìn)行優(yōu)選，得到己酸高產(chǎn)菌種，具體包括以下步驟：

步驟一：選取窖泥；

步驟二：窖泥水浴熱處理；

步驟三：篩選己酸菌；

步驟四：菌種低溫厭氧保存；

步驟五：菌種生長規(guī)律研究；

步驟六：菌種擴(kuò)大培養(yǎng)；

步驟七：灌窖養(yǎng)護(hù)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述選取窖泥具體為：對優(yōu)質(zhì)窖池黃水線下窖壁泥取樣，位于窖壁距離窖底15-20cm處進(jìn)行多點(diǎn)取樣，取樣后將窖泥揉和均勻，2-6℃真空密封保存。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述窖泥水浴熱處理具體為：

稱取一定量的老窖泥，加入裝有玻璃珠的無菌水中，連續(xù)振蕩至樣品分散均勻，形成窖泥懸液；吸取窖泥懸液于試管中，75-85℃水浴熱處理淘汰非芽孢營養(yǎng)體，水浴過程間歇晃動(dòng)避免局部受熱。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述篩選己酸菌具體為：

取窖泥懸液于裝有RCM培養(yǎng)基的三角瓶中，利用液體石蠟封住培養(yǎng)基液面，35℃恒溫培養(yǎng)11d，歷經(jīng)11d后培養(yǎng)液產(chǎn)氣過程已經(jīng)停止，觀察該培養(yǎng)階段的產(chǎn)氣情況；

選擇產(chǎn)氣量大的培養(yǎng)液進(jìn)行轉(zhuǎn)接培養(yǎng)，觀察細(xì)菌產(chǎn)氣情況以及對其進(jìn)行己酸定性定量分析，優(yōu)選己酸產(chǎn)量高的復(fù)合己酸菌。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述轉(zhuǎn)接培養(yǎng)具體為：吸取培養(yǎng)液接種至RCM培養(yǎng)基試管中，用液體石蠟封蓋液面，35℃深層恒溫培養(yǎng)11d。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述菌種低溫厭氧保存具體為：利用液體石蠟隔絕空氣將菌種進(jìn)行試管深層培養(yǎng)，然后置于2-6℃冰箱冷藏保存。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述菌種生長規(guī)律研究具體為：

采用無菌操作以5％的接種量將菌種轉(zhuǎn)接至RCM培養(yǎng)基中，35℃恒溫培養(yǎng)12d；

利用空白培養(yǎng)基作對照，每天檢測菌體產(chǎn)氣情況、OD600nm值以及菌體數(shù)量，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，菌體數(shù)量、OD600nm值為縱坐標(biāo)繪制菌種生長曲線；

根據(jù)微生物生長曲線確定最佳接種時(shí)間，保證最大的菌體數(shù)量與活力，為擴(kuò)大培養(yǎng)提供依據(jù)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述菌種擴(kuò)大培養(yǎng)具體為：

以釀造原料為主的天然培養(yǎng)基對菌種進(jìn)行逐級擴(kuò)培，先對培養(yǎng)基在121-126℃進(jìn)行30-40min高溫濕熱滅菌處理，待冷卻至室溫后添加酒頭攪拌均勻，以10％接種量進(jìn)行高液面逐級擴(kuò)大培養(yǎng)，并用少量酒頭封培養(yǎng)基液面，將窖泥己酸菌液擴(kuò)培，35℃恒溫培養(yǎng)5-6d后，菌體數(shù)量至9.6×10⁸-10.0×10⁸個(gè)/mL。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述天然培養(yǎng)基包括5％曲粉，4％酒頭，4％豆粕粉，1％窖泥粉，0.5％黃漿水，其余為水。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述灌窖養(yǎng)護(hù)具體為：

釀造車間窖池殘?jiān)闱謇硗戤吅螅弥窈瀸殉厮谋诔?0度角打孔，孔徑6-10mm，孔深5cm，孔距6-8cm；

將窖泥己酸菌液攪拌均勻，沿窖壁自上而下灌淋，灌淋一遍后稍停片刻，待菌液滲透后再灌淋；

用木質(zhì)抹板將窖壁抹平，勻撒1.0-1.5kg優(yōu)質(zhì)大曲細(xì)粉，即可將固體酒醅進(jìn)行入窖。