[發(fā)明專(zhuān)利]貓杯狀病毒病、貓傳染性鼻氣管炎和貓泛白細(xì)胞減少癥三聯(lián)疫苗及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010563316.7
• 申請(qǐng)日: 2020-06-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111632137B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-12-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳雅君;李少英;徐樹(shù)蘭
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 鄭州愛(ài)科生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61K39/295
• 分類(lèi)號(hào): A61K39/295;A61K39/12;A61K39/245;A61K39/23;A61K9/19;A61K47/46;A61P31/14;A61P31/22
• 代理公司: 鄭州優(yōu)盾知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41125
• 代理人: 冉珊敏

1.貓杯狀病毒病、貓傳染性鼻氣管炎和貓泛白細(xì)胞減少癥三聯(lián)疫苗，其特征在于：所述三聯(lián)疫苗包括抗原組分和凍干保護(hù)劑，其中抗原組分包括貓杯狀病毒BJ株滅活抗原、貓傳染性鼻氣管炎病毒SH株滅活抗原和貓泛白細(xì)胞減少癥病毒SY株滅活抗原；

所述貓杯狀病毒BJ株滅活抗原由貓杯狀病毒BJ株制備，保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO：V202002，分類(lèi)命名為：貓杯狀病毒BJ株，保藏日期為：2020年6月10日，保藏單位地址為：中國(guó).武漢.武漢大學(xué)；

所述貓傳染性鼻氣管炎病毒SH株滅活抗原由貓傳染性鼻氣管炎病毒SH株制備，保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO：V202003，分類(lèi)命名為：貓傳染性鼻氣管炎病毒SH株，保藏日期為：2020年6月10日，保藏單位地址為：中國(guó).武漢.武漢大學(xué)；

所述貓泛白細(xì)胞減少癥病毒SY株滅活抗原由貓泛白細(xì)胞減少癥病毒SY株制備，保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO：V202004，分類(lèi)命名為：貓泛白細(xì)胞減少癥病毒SY株，保藏日期為：2020年6月10日，保藏單位地址為：中國(guó).武漢.武漢大學(xué)。

2.權(quán)利要求1所述的貓杯狀病毒病、貓傳染性鼻氣管炎和貓泛白細(xì)胞減少癥三聯(lián)疫苗的制備方法，其特征在于，步驟如下：

（1）分別將貓杯狀病毒BJ株、貓傳染性鼻氣管炎病毒SH株和貓泛白細(xì)胞減少癥病毒SY株接種于懸浮F81S細(xì)胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)一段時(shí)間后，分別收集三種毒株的毒液即為三種毒株的抗原液；

（2）將步驟（1）的三種毒株的抗原液中分別加入滅活劑滅活后，再等比例混勻得混勻液，再加入凍干保護(hù)劑冷凍真空干燥即得貓杯狀病毒病、貓傳染性鼻氣管炎和貓泛白細(xì)胞減少癥三聯(lián)疫苗。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的貓杯狀病毒病、貓傳染性鼻氣管炎和貓泛白細(xì)胞減少癥三聯(lián)疫苗的制備方法，其特征在，所述步驟（1）中的懸浮F81S細(xì)胞的培養(yǎng)方法為：

① 將全懸浮F81S細(xì)胞接種于含有2%血清懸浮培養(yǎng)液的專(zhuān)用懸浮培養(yǎng)搖瓶中，在36.5-37.5℃培養(yǎng)60-72h進(jìn)行擴(kuò)增，細(xì)胞培養(yǎng)液細(xì)胞密度不低于5×10⁵個(gè)/mL，且細(xì)胞活力≥90%，按照1:（3-5）的比例傳代放大培養(yǎng)，得F81S細(xì)胞懸浮液；

② 將步驟①培養(yǎng)得到的F81S細(xì)胞懸浮液接種入生物反應(yīng)器中，接種體積為1-2L，補(bǔ)加2%血清懸浮培養(yǎng)液至5L，培養(yǎng)72-96h后的細(xì)胞培養(yǎng)液細(xì)胞密度不低于2×10⁶個(gè)/mL，且細(xì)胞活力≥90%；

③ 取步驟②得到的細(xì)胞培養(yǎng)液3.5L轉(zhuǎn)移至生物反應(yīng)器中，補(bǔ)加含2%血清懸浮培養(yǎng)液至10L，繼續(xù)培養(yǎng)72-96h后，細(xì)胞培養(yǎng)液細(xì)胞密度不低于2×10⁶個(gè)/mL，且細(xì)胞活力≥90%，即得到可用作接毒的懸浮F81S細(xì)胞培養(yǎng)液。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的貓杯狀病毒病、貓傳染性鼻氣管炎和貓泛白細(xì)胞減少癥三聯(lián)疫苗的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中貓杯狀病毒BJ株的接毒量為懸浮F81S細(xì)胞培養(yǎng)液體積的2-5%，貓傳染性鼻氣管炎病毒SH株的接毒量為懸浮F81S細(xì)胞培養(yǎng)液體積的2-5%，貓泛白細(xì)胞減少癥病毒SY株的接毒量為懸浮F81S細(xì)胞培養(yǎng)液體積的5-15%；貓杯狀病毒BJ株、貓傳染性鼻氣管炎病毒SH株和貓泛白細(xì)胞減少癥病毒SY株的培養(yǎng)時(shí)間分別為24-48小時(shí)、24-48小時(shí)和72-96小時(shí)，當(dāng)細(xì)胞活率﹤30%時(shí)收獲病毒液，收獲的毒液于-20℃以下保存。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的貓杯狀病毒病、貓傳染性鼻氣管炎和貓泛白細(xì)胞減少癥三聯(lián)疫苗的制備方法，其特征在，所述步驟（2）中滅活劑為BEI滅活劑，BEI滅活劑為0.4mol/LBEA和0.4mol/L NaOH以體積比1:1比例混合制備，每種毒株的抗原液中加入滅活劑后毒株的終濃度為3mM，滅活時(shí)間為36-40小時(shí)。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的貓杯狀病毒病、貓傳染性鼻氣管炎和貓泛白細(xì)胞減少癥三聯(lián)疫苗的制備方法，其特征在，所述步驟（2）中凍干保護(hù)劑為脫脂奶粉；混勻液與凍干保護(hù)劑的體積比為1:（1-5）。

7.權(quán)利要求1所述的三聯(lián)疫苗在制備聯(lián)合預(yù)防貓杯狀病毒病、貓傳染性鼻氣管炎和貓泛白細(xì)胞減少癥藥物中的應(yīng)用。