[發明專利]一種將肝細胞誘導為肝癌細胞的基因組合及其應用

在審

• 申請號: 202010560770.7
• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN111635912A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 深圳市體內生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N5/10;A01K67/027;A61K49/00;C12Q1/18
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供一種將肝細胞誘導為肝癌細胞的基因組合及其應用，所述基因組合包括TP53突變基因和c?MYC基因。具體為利用慢病毒在肝細胞內過表達所述基因組合，即可誘導正常肝細胞形成肝癌細胞。將轉入所述基因組合的人原代肝細胞移植至Fah基因突變的免疫缺陷動物如小鼠體內培養即可得到所述原發性肝癌人源化小鼠模型。該模型的肝癌細胞由正常肝細胞轉化而來，且是一種正常肝臟細胞與肝癌細胞共同嵌合的體內模型，可更好地模擬人體肝癌形成過程及肝癌微環境，便于研究人員利用該模型研究肝癌的發生、發展及演變過程，為新型肝癌藥物的開發、藥物的藥理毒理研究及肝癌治療藥物的耐藥性機制探索提供了有利模型。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種將肝細胞誘導為肝癌細胞的基因組合及其應用，尤其涉及一種將肝細胞誘導為肝癌細胞的基因組合、利用其制備得到的人肝癌細胞和原發性肝癌人源化動物模型及構建方法和應用。

背景技術

肝癌主要分為肝細胞癌(hepa-tocellular carcinoma，HCC)和肝內膽管癌(intra-hepatic cholangiocarcinoma，ICC)和混合型肝癌，是我國高發及高死亡率的腫瘤之一，其中肝細胞癌占肝癌總量的85％-90％。由于肝癌早期發病癥狀不明顯，極易被忽視，而一經發現半數以上病人已處于中晚期，因此，肝癌是預后最差的惡性腫瘤之一。

肝癌的發生和發展是多種因素共同作用的結果，目前肝癌的致病機理尚未十分清楚，現有的多種治療方案也不能夠有效緩解晚期腫瘤進展，因此，深入研究肝癌發病的分子及細胞機理對肝癌的治療具有重要意義。

現有的肝癌動物模型主要包括自發性肝癌模型、誘發性肝癌動物模型、基因工程肝癌動物模型及原位移植肝癌動物模型。但是，自發性肝癌模型與人體肝癌發生環境較為接近，但發病效率低且周期長，難以得到廣泛應用；誘發性肝癌動物模型具有操作簡便、用時短等優勢，是目前應用較多的動物模型，但動物肝癌模型與人體存在差異，因此不能很好的還原人體肝癌細胞特性，結果與人體實際情況存在差異；基因工程肝癌動物模型需要較高的技術水平，且成本高，環境要求高，限制了一般實驗室的應用，且目前主要是小鼠肝癌的誘導。

除了原位移植動物模型外，以上幾種模型均為小鼠或大鼠的肝癌模型，與人體存在較大差異，不能很好的反應人體肝癌細胞生存生長特性，也不能夠有效的反應細胞對藥物的反應，給肝癌發病機制研究及肝癌藥物研發造成了極大的不便。

CN101185764A公開了一種原位移植性小鼠肝癌模型及其制備方法和應用。將穩定轉染EGFP的H22細胞株注射入BALB/c小鼠腹腔擴增，從H22腹水癌小鼠腹腔內抽取腹水，分離細胞并制成細胞懸液，打開小鼠腹腔，用微量注射器抽取細胞懸液注射入小鼠肝臟，用75％酒精棉簽按壓針孔至肝臟表面不再滲血，用粘合劑封閉針孔，再以生理鹽水沖洗肝臟表面，分層關腹。該模型是一種可以用于研究原發性肝癌發展及轉移的機制、同時也適用于抗腫瘤藥物開發、肝癌的實驗性治療及診斷研究的理想的原發性肝癌模型。

但是，原位移植細胞系的肝癌模型不能夠模擬人體肝癌細胞微環境，原位移植人體肝癌細胞的小鼠則存在移植效率低，建模周期長等問題，影響了其在研究中的應用。

因此，本領域需要開發一種能夠模擬人體肝癌細胞微環境且發病率高的肝癌模型，為肝癌的治療以及致病機理的研究奠定基礎。

發明內容

鑒于現有技術中存在的問題，本發明提供一種將肝細胞誘導為肝癌細胞的基因組合及其應用。利用所述基因組合得到的人肝癌細胞以及原發性肝癌模型在篩選或制備肝癌藥物、診斷肝癌患者等領域具有廣泛的應用前景。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供一種將肝細胞誘導為肝癌細胞的基因組合，所述基因組合包括TP53突變基因和c-MYC基因。