[發明專利]一種新冠病毒N蛋白優勢抗原表位肽及其應用

有效

• 申請號: 202010560561.2
• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN111848752B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發明（設計）人: 王云龍;王國強;程蕾;王繼創;李玉林;張怡青;張永生
• 申請（專利權）人: 河南省生物工程技術研究中心;鄭州倍賽泰生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/165
• 分類號: C07K14/165;C07K16/10;G01N33/533;G01N33/558;G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 鄭州銘晟知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 41134
• 代理人: 張鵬

本發明屬于冠狀病毒檢測技術領域，具體涉及一種新冠病毒N蛋白優勢表位抗原及其應用。該N蛋白優勢表位抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述N蛋白優勢表位抗原可與新冠病毒抗體特異性結合，將其用于新冠病毒的抗體檢測時，可有效避免假陽性的檢測結果。

技術領域

本發明屬于冠狀病毒檢測技術領域，具體涉及一種新冠病毒N蛋白優勢表位抗原及其應用。

背景技術

新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)為β屬的冠狀病毒，是目前已知的第7種可感染人類的冠狀病毒，其余6種分別是HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV。該疾病以發熱、干咳、乏力為主要表現，常伴有氣促和呼吸困難等，在嚴重病例中，新冠肺炎可導致嚴重急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥休克，多功能衰竭甚至死亡。

新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)特異IgM和IgG抗體檢測寫進了國家衛生健康委于2020年3月3日發布的“新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)”，作為臨床確診標準，國家藥品監督管理局(NMPA)也應急審批了廣州萬孚(膠體金試紙條)、英諾特(唐山)(膠體金試劑條)等多個抗體檢測試劑盒。徐萬洲等在19例核酸檢測陰性但基于臨床癥狀確診的SARS-CoV-2患者中，有16例患者IgM陽性，其陽性率達到84.21％，有18例患者IgG陽性，其陽性率達到94.74％，說明抗體的檢測可以有效地彌補核酸檢測漏檢的風險，發揮其在新型冠狀肺炎的及時診治及防控中的作用。但臨床現也有反映出現了較多的假陽性，困擾臨床決策。

特異IgM和IgG免疫測定假陽性通常有以下兩個方面的原因，一是試劑盒所用抗原本身的特異性及陽性判斷值(Cut-off value)的設定；二是患者標本中存在導致免疫測定假陽性的內源性或外源性干擾物質。而試劑盒所用抗原本身的特異性是檢測特異性的基礎。這是由抗原決定簇和抗體的抗原結合區的空間構象決定的。抗體抗原結合區的空間構象是由該區的氨基酸序列來決定源。氨基酸的序列則由基因序列決定。抗體的特異性，并不是針對抗原，而是針對某個特定的空間構象。這就是為什么有的抗體可以識別道2個毫不相干的抗原。比如抗梅毒抗體，同時可以識別心磷脂。因此，優選特異性抗原片段對減少特異IgM和IgG免疫測定的假陽性有重要意義。

SARS-CoV-2核衣殼蛋白(Nucleocapsid,N)位于病毒內部，在β屬冠狀病毒之間相對比較保守，與其它6種冠狀冠狀病毒(HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV)的N蛋白全長具有一定的同源性，檢測時容易發生交叉反應性，因此篩選出同源性低，免疫性強的N蛋白片段進行組合，避免交叉反應性，是十分重要的。

發明內容

本發明提供一種新冠病毒N蛋白優勢表位抗原，以解決現有技術中新冠病毒檢測特異性差的問題。

本發明的第二目的在于提供了一種抗體。

本發明的第三目的在于提供一種標記復合物。

本發明的第四目的在于提供一種試紙條/檢測卡。

本發明的第五目的在于提供一種試劑盒。

本發明的目的還在于提供了上述中的任意一項或幾項的應用。

本發明的新冠病毒N蛋白優勢表位抗原采用如下技術方案：一種新冠病毒N蛋白優勢表位抗原，所述N蛋白優勢表位抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述N蛋白優勢表位抗原可與新冠病毒抗體特異性結合。

本發明的抗體采用如下技術方案：一種抗體，所述抗體通過采用如上所述的N蛋白優勢表位抗原作為免疫原免疫動物制備得到。例如，可通過將所述N蛋白優勢表位抗原用于免疫動物，制備得到抗所述N蛋白優勢表位抗原的抗體。本發明的抗體可為單克隆抗體或多克隆抗體，其可用于制備新冠病毒檢測試劑(例如，用作制備免疫層析試紙條的原料或作為陽性對照等)。