[發明專利]一種新冠病毒N蛋白優勢抗原表位肽及其應用

有效

• 申請號: 202010560561.2
• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN111848752B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發明（設計）人: 王云龍;王國強;程蕾;王繼創;李玉林;張怡青;張永生
• 申請（專利權）人: 河南省生物工程技術研究中心;鄭州倍賽泰生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/165
• 分類號: C07K14/165;C07K16/10;G01N33/533;G01N33/558;G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 鄭州銘晟知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 41134
• 代理人: 張鵬

1.一種新冠病毒N蛋白優勢表位抗原，其特征在于，所述N蛋白優勢表位抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述N蛋白優勢表位抗原可與新冠病毒抗體特異性結合。

2.一種抗體，其特征在于，所述抗體通過采用如權利要求1所述的N蛋白優勢表位抗原作為免疫原免疫動物制備得到。

3.一種標記復合物，其特征在于，所述標記復合物的組成包括如權利要求1所述的N蛋白優勢表位抗原和標記物，所述標記物包括但不限于下述中的任意一種：膠體金、熒光微球或HRP。

4.一種試紙條/檢測卡，其特征在于，制備所述試紙條/檢測卡的原料包括下述中的任意一種或幾種的組合：如權利要求1所述的N蛋白優勢表位抗原、如權利要求2所述的抗體和如權利要求3所述的標記復合物。

5.根據權利要求4所述的試紙條/檢測卡，其特征在于，所述試紙條/檢測卡包括樣品墊、結合墊、包被膜和吸水墊，所述結合墊上包被有如權利要求3所述的標記復合物；所述包被膜上設有檢測線和質控線，所述檢測線上包被有所述N蛋白優勢表位抗原。

6.根據權利要求5所述的試紙條/檢測卡，其特征在于，所述標記復合物采用包括所述N蛋白優勢表位抗原和熒光微球在內的原料制備得到。

7.根據權利要求6所述的試紙條/檢測卡，其特征在于，所述標記復合物采用包括下述步驟的方法制備得到：(1)向采用去離子水洗滌后的Eu³⁺熒光微球中加入硼酸鹽緩沖液重懸Eu³⁺熒光微球；(2)向步驟(1)所得重懸液中分別加入EDC和NHS，搖床避光活化20min；(3)4℃條件下15000r/min離心15min，棄上清；(4)加入硼酸鹽緩沖液反復吹打復溶；(5)加入所述新冠病毒N蛋白優勢表位抗原，超聲混勻并置于搖床中偶聯1h；(6)15000r/min離心15min，紫外下觀察是否有貼壁現象，棄上清；(7)加入1mL微球保護液、50μL 10％BSA，搖床震蕩封閉1h，即得所述標記復合物；所述新冠病毒N蛋白優勢表位抗原、EDC和NHS的質量比為1:5:5，所述新冠病毒N蛋白優勢表位抗原與Eu³⁺熒光微球的質量體積比為1:1，所述新冠病毒N蛋白優勢表位抗原的質量以μg計，所述Eu³⁺熒光微球的體積以μL計；所述微球保護液的成分為Tris 6.0g/L、蔗糖25.0g/L、海藻糖25.0g/L、BSA20.0g/L、Tween-20 1.0g/L、小牛血清100g/L、酪蛋白鈉1g/L、PVP30 1.0g/L和Proclin-300 1g/L。

8.根據權利要求4-7所述的試紙條/檢測卡，其特征在于，所述質控線處包被有0.5mg/mL的羊抗鼠抗體，所述檢測線處包被的N蛋白優勢表位抗原的濃度為0.4mg/mL。

9.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括下述中的任意一種或幾種的組合：如權利要求4-8中任意一項所述的試紙條/檢測卡、如權利要求1所述的N蛋白優勢表位抗原、如權利要求2所述的抗體和如權利要求3所述的標記復合物。

10.如權利要求1所述的新冠病毒N蛋白優勢表位抗原/如權利要求2所述的抗體/如權利要求3所述的標記復合物/如權利要求9所述的試劑盒/如權利要求4-8中任意一項所述的試紙條/檢測卡中的任意一項或幾項在制備新冠病毒檢測試劑中的應用。