[發明專利]基于質譜技術發現消化系統腫瘤多肽譜生物標志物的一種無創快捷的篩選方法及其應用

在審

• 申請號: 202010559765.4
• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN113820401A
• 公開（公告）日: 2021-12-21
• 發明（設計）人: 黃飛娟;吳正治;黃東娜;湯弋哲;張圓;曹榮;吳南輝;賈秀琴
• 申請（專利權）人: 深圳市第二人民醫院(深圳市轉化醫學研究院);深圳市未美醫療科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86;G01N33/574;G01N33/68
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 潘登

本發明涉及基于質譜技術發現消化系統腫瘤多肽譜生物標志物的一種無創快捷的篩選方法及其應用，所述篩選方法包括：(1)取消化系統腫瘤患者和健康人臨床唾液樣本，進行多肽提??；(2)對提取到的多肽樣本進行多肽譜峰分析；(3)將得到的多肽譜峰分析結果進行統計分析，得到顯著差異肽峰；(4)進一步地，進行診斷小組的建立與驗證、鑒定顯著差異肽峰的蛋白歸屬。本發明創造性地從唾液中篩選出一系列可以用于腸癌診斷的生物標志物，這些腸癌生物標志物的敏感度、特異度和準確度顯著高于目前常用的FOBT法。且這些腸癌生物標志物來源于唾液，因此為腸癌的診斷提供了新的非侵入性檢測方法。本方法具有無創、高通量、微上樣量、快速便捷等特點。

技術領域

本發明屬于分子診斷技術領域，具體涉及消化系統腫瘤生物標志物及其篩選方法和應用，尤其涉及基于質譜技術發現消化系統腫瘤多肽譜生物標志物的一種無創快捷的篩選方法及其應用。

背景技術

結直腸癌是世界上第三大最常見的癌癥，在所有癌癥死亡率中排名第二，結直腸癌是多因素疾病，飲食習慣、生活習慣、肥胖、吸煙史、非甾體類抗炎藥物和阿司匹林服用史、遺傳因素、其他消化道疾病會增加結直腸癌的發生率。結直腸癌是一種侵襲性疾病，腫瘤具有生物學和遺傳學上的異質性，其致癌作用在分子水平上尚不清楚。結直腸癌從良性腺瘤開始發展，通過抑癌基因調節后，進展為惡性腫瘤。目前發現結直腸癌的易感基因為APC(Adenomatous polyposis coli)，與結腸癌相關的抑癌基因為KRAS、p53、DCC(Deletedin colon cancer)、N-CAM(Neural cell adhesion molecule)、MCC(Mutated in coloncancer)。結腸癌的篩查為大便隱血試驗(Faecal occult blood testing，FOBT)和內鏡檢查，大便隱血試驗(Faeces occult blood testing，FOBT)可以有效降低結腸癌死亡率，內鏡檢查雖可用于觀察結腸病理組織，但費用昂貴、且可能引起不適感和腸穿孔等副作用。FOBT的敏感度為95％，特異度為15％-30％。結腸癌早期患者無特異性癥狀，多為乏力、腹脹、排便習慣改變等。結直腸癌80％為散發性癌癥，患者的預后很差，因此，早期檢測、定時復查、積極監測，選擇合適的治療方案，可降低結直腸癌死亡率。腫瘤標志物常用的是CEA和CA19-9，但對結腸癌的檢測特異度和靈敏度不高，故結直腸癌生物標志物的深入探究十分必要。

CN109943636A公開了一種結直腸癌微生物標志物及其應用，所述微生物標志物包括糞桿菌屬、鏈球菌屬和梭菌屬。該發明的結直腸癌微生物標志物預測結直腸癌風險精確度高，靈敏性好，只需要獲取腸道微生物標志物的豐度，通過模型計算給出風險預警，評估患結直腸癌的可能性，可以用于預防警示受試者和提示其是否有必要進一步診斷確診，還有利于個體通過調整飲食或醫療界入改善腸道菌微環境，從而減少個體患結直腸癌的風險。

CN106191259A公開了人結直腸癌或人結直腸癌轉移的預測性生物標志物，它包括Ube2v1蛋白。基于構建的Ube2v1穩定過表達的結直腸細胞株和裸鼠實驗結果表明，Ube2v1可促進腫瘤的生長和轉移。沒有功能的Ube2v1通過結合Ube2N降解去乙?；窼irt1，從而削弱Sirt1對組蛋白H4K16位點的去乙?；饔茫龠M結直腸癌的轉移。在結直腸癌細胞中添加NSC697923化合物，Ube2v1對去乙?；窼irt1的降解作用明顯減弱。結果表明Ube2v1能作為結直腸癌發生和轉移的標志物，且NSC697923可以應用于制備抗結直腸癌轉移藥物，具有重要的臨床應用價值。

基于臨床信息和綜合基因組分析鑒定生物標志物，可提高診斷和預后。質譜儀和生物信息學工具可以對待測樣品進行高精確度、高特異性的蛋白質組學分析，但現有技術中利用該策略進行腸癌生物標志物篩選的報道還鮮少。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的在于提供消化系統腫瘤生物標志物及其篩選方法和應用，尤其提供基于質譜技術發現消化系統腫瘤多肽譜生物標志物的一種無創快捷的篩選方法及其應用。