[發明專利]一種冠狀病毒/流感病毒/鼻病毒核酸聯合檢測試劑盒及使用方法

在審

• 申請號: 202010559197.8
• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN111808989A
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 韓勛領;孫松松;顏蓉;李紅玉;羅鋒
• 申請（專利權）人: 重慶浦洛通基因醫學研究院有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 重慶智慧之源知識產權代理事務所(普通合伙) 50234
• 代理人: 孫方

1.一種冠狀病毒/流感病毒/鼻病毒核酸聯合檢測試劑盒，其特征在于：包括SARS-Cov-2、SARS-CoV、MERS-CoV、HCoV-HKU1、HCoV-OC43、HCoV-229E和HCoV-NL63七種冠狀病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和鼻病毒的雙靶點特異性引物和探針，以及外源性內參的特異性引物和探針；

所述特異性引物和探針的核苷酸基因序列如下：

1)所述冠狀病毒(SARS-CoV-2)的靶點1、靶點2特異性引物和探針的核苷酸基因序列如SEQ ID NO.1到SEQ ID NO.6所示，

2)所述冠狀病毒(SARS-CoV)的靶點1、靶點2特異性引物和探針的核苷酸基因序列如SEQ ID NO.7到SEQ ID NO.12所示，

3)所述冠狀病毒(MERS-CoV)的靶點1、靶點2特異性引物和探針的核苷酸基因序列如SEQ ID NO.13到SEQ ID NO.18所示，

4)所述冠狀病毒(HCoV-HKU1/HCoV-OC43)的靶點1、靶點2特異性引物和探針的核苷酸基因序列如SEQ ID NO.19到SEQ ID NO.27所示，

5)所述冠狀病毒(HCoV-229E/HCoV-NL63)的靶點1、靶點2特異性引物和探針的核苷酸基因序列如SEQ ID NO.28到SEQ ID NO.35所示，

6)所述甲型流感病毒的靶點1、靶點2特異性引物和探針的核苷酸基因序列如SEQ IDNO.36到SEQ ID NO.42所示，

7)所述乙型流感病毒的靶點1、靶點2特異性引物和探針的核苷酸基因序列如SEQ IDNO.43到SEQ ID NO.50所示，

8)所述鼻病毒的靶點1、靶點2特異性引物和探針的核苷酸基因序列如SEQ ID NO.51到SEQ ID NO.61所示，

9)所述外源性內參的特異性引物和探針的核苷酸基因序列如SEQ ID NO.62到SEQ IDNO.64所示。

2.如權利要求1所述一種冠狀病毒/流感病毒/鼻病毒核酸聯合檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括PCR反應液、陰性對照和陽性對照。

3.如權利要求2所述一種冠狀病毒/流感病毒/鼻病毒核酸聯合檢測試劑盒，其特征在于：所述PCR反應液包括pH8.3的Tris-HCl 20mM，KCl 100mM，Mg²⁺2mM，dNTPs 0.4mM，逆轉錄酶0.3U/μL，熱啟動Taq DNA聚合酶0.2U/μL，熱敏UDG酶0.1U/μL。

4.如權利要求1所述一種冠狀病毒/流感病毒/鼻病毒核酸聯合檢測試劑盒，其特征在于：所述外源性內參為RNaseP基因片段，經DNA重組技術構建的陽性質粒。

5.如權利要求2所述一種冠狀病毒/流感病毒/鼻病毒核酸聯合檢測試劑盒，其特征在于：所述陽性對照為含有SARS-Cov-2、SARS-CoV、MERS-CoV、HCoV-HKU1、HCoV-OC43、HCoV-229E和HCoV-NL63七種冠狀病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和鼻病毒的核酸序列片段經DNA重組技術構建的陽性質粒。

6.如權利要求1-5中任一項所述一種冠狀病毒/流感病毒/鼻病毒核酸聯合檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒采用8連管設計，所述8連管中分別用于檢測SARS-Cov-2冠狀病毒、SARS-CoV冠狀病毒、MERS-CoV冠狀病毒、HCoV-HKU1/HCoV-OC43冠狀病毒、HCoV-229E/HCoV-NL63冠狀病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和鼻病毒。