[發(fā)明專利]一種攜帶修飾的小RNA的建庫方法及其應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010558491.7 | 申請日： | 2020-06-18 |
| 公開（公告）號： | CN113817803A | 公開（公告）日： | 2021-12-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 黃鵬羽;王鶴鳴;黃榮;李玲 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海科技大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/6806 | 分類號： | C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06 |
| 代理公司： | 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 朱凌嬌;許亦琳 |
| 地址： | 201210 上*** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 攜帶 修飾 rna 方法 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種攜帶修飾的小RNA的建庫方法，至少包括如下步驟：
1)利用去甲基化試劑去除攜帶修飾的小RNA的甲基化修飾；
2)利用第一轉(zhuǎn)化劑使攜帶修飾的小RNA的5’端的5’-OH轉(zhuǎn)化為5’P，3’P端轉(zhuǎn)化為3’-OH；
3)利用第二轉(zhuǎn)化劑使攜帶修飾的小RNA的5’端的5-cap轉(zhuǎn)化為5’P；
4)將攜帶修飾的小RNA上連接測序接頭；
5)利用包括逆轉(zhuǎn)錄酶在內(nèi)的逆轉(zhuǎn)錄試劑將攜帶修飾的小RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA；
6)將cDNA純化后進行PCR擴增，獲得攜帶修飾的小RNA的測序文庫。
2.如權(quán)利要求1所述的攜帶修飾的小RNA的建庫方法，其特征在于，還包括以下特征中的一項或多項：
a.所述攜帶修飾的小RNA為末端及內(nèi)部攜帶修飾的小RNA；
b.所述攜帶修飾的小RNA的核苷酸長度為15-40nt。
3.如權(quán)利要求1所述的攜帶修飾的小RNA的建庫方法，其特征在于，步驟1)中，所述甲基化修飾包括N1-甲基腺苷，N3-甲基胞嘧啶和N1-甲基鳥苷甲基化修飾。
4.如權(quán)利要求1所述的攜帶修飾的小RNA的建庫方法，其特征在于，步驟1)中，所述去甲基化試劑選自大腸桿菌衍生的AlkB及其D135S突變株的混合物。
5.如權(quán)利要求1所述的攜帶修飾的小RNA的建庫方法，其特征在于，步驟2)中，所述第一轉(zhuǎn)化劑能夠?qū)⑿NA3端的3’-P或2’，3’-cP去磷酸化基團以轉(zhuǎn)化為3’-OH及5’端的5’-OH轉(zhuǎn)化為5’P。
6.如權(quán)利要求5所述的攜帶修飾的小RNA的建庫方法，其特征在于，步驟2)中，所述第一轉(zhuǎn)化劑選自T4多核苷酸激酶。
7.如權(quán)利要求1所述的攜帶修飾的小RNA的建庫方法，其特征在于，步驟3)中，所述第二轉(zhuǎn)化劑選自RNA5'焦磷酸水解酶。
8.如權(quán)利要求1所述的攜帶修飾的小RNA的建庫方法，其特征在于，步驟4)中，所述測序接頭中包含UMI片段。
9.如權(quán)利要求1所述的攜帶修飾的小RNA的建庫方法，其特征在于，步驟5)中，所述逆轉(zhuǎn)錄酶選自熱穩(wěn)定的II類內(nèi)含子逆轉(zhuǎn)錄酶。
10.如權(quán)利要求1-9所述的攜帶修飾的小RNA的建庫方法在基因測序領(lǐng)域中的用途。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于上海科技大學(xué)，未經(jīng)上海科技大學(xué)許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202010558491.7/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
