[發明專利]一種用于copA和czcD基因雙重熒光定量PCR檢測的引物和探針組及試劑盒

在審

• 申請號: 202010558138.9
• 申請日: 2020-06-11
• 公開（公告）號: CN111944880A
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發明（設計）人: 汪華;王群;孫達;宋亞麗;陳勇民;薛向東
• 申請（專利權）人: 浙江科技學院
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于銅耐受基因copA熒光PCR檢測的引物組，其特征在于：引物組包括，

上游引物copA-F：5’ATYGAGCTKCATYTGACCGG 3’，如SEQ ID NO.1所示；

下游引物copA-R：5’ATYTTCMAGKTCRCTCCACATGCC 3’，如SEQ ID NO.2所示；

探針copA-P：5’TGSATBGGRTGSGYCATCATVSTGTC 3’，如SEQ ID NO.3所示；探針的5’端標記有FAM熒光基團，3’端標記BHQ1基團。

2.一種用于鎘耐受基因czcD熒光PCR檢測的引物和探針組，其特征在于：包括，

上游引物czcD-F：5’CGACGCCGCGCACATG 3’，如SEQ ID NO.4所示；

下游引物czcD-R：5’TANCCSSCGACGCCGA 3’，如SEQ ID NO.5所示；

探針czcD-P：5’CCGCGCCGARRTSCTCG 3’，如SEQ ID NO.6所示；探針的5’端標記有VIC熒光基團，3’端標記BHQ1基團。

3.根據權利要求1所述的用于copA基因熒光PCR檢測的引物組，其特征在于：所述引物根據copA基因序列進行設計，該靶片段的序列如SEQ ID NO.7所示。

4.根據權利要求2所述的用于czcD基因熒光PCR檢測的引物和探針組，其特征在于：所述引物和探針根據czcD基因序列進行設計，該靶片段的序列如SEQ ID NO.8所示。

5.一種用于copA和czcD基因雙重熒光定量PCR檢測的試劑盒，其特征在于：包括PCR反應液、混合酶液、陽性標準品、弱陽性質控品和強陽性質控品；所述PCR反應液包括引物和探針；

所述引物為：上游引物copA-F：5’ATYGAGCTKCATYTGACCGG 3’，如SEQ ID NO.1所示；下游引物copA-R：5’ATYTTCMAGKTCRCTCCACATGCC 3’，如SEQ ID NO.2所示；上游引物czcD-F：5’CGACGCCGCGCACATG 3’，如SEQ ID NO.4所示；下游引物czcD-R：5’TANCCSSCGACGCCGA 3’，如SEQ ID NO.5所示；

所述探針為：探針copA-P：5’TGSATBGGRTGSGYCATCATVSTGTC 3’，如SEQ ID NO.3所示；探針czcD-P：5’CCGCGCCGARRTSCTCG 3’，如SEQ ID NO.6所示；探針的5’端標記有熒光基團，3’端標記有BHQ1基團，且探針copA-P和探針czcD-P分別采用不同熒光發光基團進行標記；

所述陽性標準品、弱陽性質控品和強陽性質控品均包括含有copA和czcD基因片段的重組質粒。

6.根據權利要求5所述的用于copA和czcD基因雙重熒光定量PCR檢測的試劑盒，其特征在于：所述PCR反應液包括濃度為0.3-0.5mM含dUTP的dNTPs、2-6mM的Mg₂SO₄、2％-8％的海藻糖、1％-4％DMSO、0.2％-1％甜菜堿、0.5％-2％的BSA、0.1-1nM納米金(直徑2nm-10nm)、0.2-0.8μM的引物和0.2-0.5μM的探針。

7.根據權利要求5所述的用于copA和czcD基因雙重熒光定量PCR檢測的試劑盒，其特征在于：所述混合酶液包括3-6U的HotStart Taq酶和0.2-0.4U的UNG酶。