[發(fā)明專利]一種合成mcl-PHA的四種微生物混合發(fā)酵方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010558079.5
• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN111676253A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈曉強(qiáng);李蘇航
• 申請（專利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類號: C12P7/62
• 分類號: C12P7/62;C12P39/00;C12N1/20;C12N1/16;C12R1/40;C12R1/685;C12R1/865;C12R1/02
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 王麗

1.一種合成mcl-PHA的四種微生物混合發(fā)酵方法，其特征是四種微生物為重組菌P.putida-acs KT2440；A.niger為中國微生物普通菌種保藏中心，編號為3.3928；釀酒酵母為S.cerevisiae L2612；醋酸桿菌經(jīng)測序鑒定為A.orientalis。

2.一種合成mcl-PHA的四種微生物混合發(fā)酵方法，其特征是包括步驟如下：

1)：將所得到的保存在斜面培養(yǎng)基的A.niger菌種轉(zhuǎn)接到新的試管斜面上，經(jīng)過培養(yǎng)待長滿孢子繼續(xù)轉(zhuǎn)接到其他試管斜面培養(yǎng)基上以備使用，分別將S.cerevisiae L2612、A.orientalis、P.putida-acsKT2440甘油菌接種至試管中，進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)制作種子液；

2)：將含有A.niger黑色菌絲體瓊脂平板培養(yǎng)基切成瓊脂小塊，將其添加至淀粉原料培養(yǎng)基中，在搖床下進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)酵生成葡萄糖水解液；

3)、使用糖化后的葡萄糖水解液作為底物，同時添加S.cerevisiae L2612與A.orientalis混合種子液，混合發(fā)酵生成含乙酸發(fā)酵液；

4)、使用3)中獲得的乙酸發(fā)酵液作為底物，加入P.putida-acs KT2440種子液，在P.putida-acs KT2440胞內(nèi)有效地積聚mcl-PHA。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所述步驟1)是將A.niger孢子在平板上畫線生長形成黑色菌絲體分別將S.cerevisiae L2612、A.orientalis、P.putida-acsKT2440甘油菌接種至試管中，進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)發(fā)酵制作種子液。

4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所述步驟2)將含有A.niger黑色菌絲體瓊脂平板培養(yǎng)基切成長寬為0.5-1cm瓊脂小塊，將其添加至淀粉原料培養(yǎng)基中，在30℃，220r/min搖床下進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)酵生成葡萄糖水解液。

5.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所述步驟3)S.cerevisiae L2612與Aorientalis的種子液依照體積比1∶1-60制成混合種子液，取接入步驟2)生成的葡萄糖水解液；并按照混合種子液∶步驟2)生成的含葡萄糖水解液體積比1∶33-200進(jìn)行搖床混合培養(yǎng)發(fā)酵，生成含乙酸發(fā)酵液。

6.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所述步驟4)取P.putida-acsKT2440種子液并按照P.putida-acsKT2440種子液∶步驟3)生成的含乙酸發(fā)酵液體積比1∶33-200接種至步驟3)含乙酸發(fā)酵液中。