[發(fā)明專利]一種過表達Hpgds的重組脂肪干細胞、制備方法及其應用

有效

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• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN111549000B
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發(fā)明（設計）人: 肖苒;歐陽龍;邱道靜;傅歆;楊志崗
• 申請（專利權）人: 中國醫(yī)學科學院整形外科醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/861;A61K35/28;A61P17/02;A61P3/10
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王煥

本發(fā)明提供了一種過表達Hpgds基因的重組脂肪干細胞、制備方法和及其應用，屬于基因工程藥物技術領域，所述重組脂肪干細胞通過將表達Hpgds基因的慢病毒載體感染脂肪干細胞獲得。所述制備方法包括以下步驟：構建表達Hpgds基因的慢病毒載體；提取脂肪干細胞；將所述表達Hpgds基因的慢病毒載體感染脂肪干細胞獲得重組脂肪干細胞；所述重組的脂肪干細胞在三維生物材料支架上進行增殖，能夠安全、持久的表達免疫調節(jié)基因Hpgds，以加速糖尿病受損皮膚愈合，縮短愈合時間。

技術領域

本發(fā)明涉及基因工程藥物技術領域，尤其是涉及一種表達Hpgds的重組脂肪干細胞、制備方法及其在糖尿病創(chuàng)面修復中的應用。

背景技術

在糖尿病患者的發(fā)病過程中，有30％的患者會發(fā)生皮膚感染，而且經(jīng)常反復發(fā)作，持久不愈。患糖尿病的人，一旦發(fā)生皮膚感染后，皮膚潰爛的癥狀就會加重，而且不容易控制，如果治療不及時就會向縱深發(fā)展，甚至最后會導致截肢，嚴重地影響患者的生活質量。據(jù)統(tǒng)計由于糖尿病潰瘍所導致的截肢在非創(chuàng)傷性截肢患者中達到50％以上，因此糖尿病患者發(fā)生皮膚潰瘍越來越引起醫(yī)務工作者及研究人員的重視。

在糖尿病狀態(tài)下，中性粒細胞數(shù)目和功能異常，巨噬細胞功能和表型轉換紊亂，炎癥復合體活化，形成持續(xù)擴大的炎癥反應，從而造成創(chuàng)面愈合障礙。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種過表達Hpgds的重組脂肪干細胞、制備方法及其應用，所述過表達Hpgds基因的重組脂肪干細胞具有能夠安全、持久的表達免疫調節(jié)基因Hpgds的優(yōu)勢，協(xié)同脂肪干細胞共同發(fā)揮作用。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了以下技術方案：

一種過表達Hpgds的重組脂肪干細胞，重組脂肪干細胞是通過將表達Hpgds的基因轉染到脂肪干細胞中獲得。

在一個優(yōu)選的實施方案中，脂肪干細胞來源于人體脂肪組織。

在一個實施方案中，表達Hpgds基因的載體為腺病毒載體，優(yōu)選的，腺病毒載體為pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP。

在一個實施方案中，提供了重組脂肪干細胞的制備方法，包括以下步驟：

構建表達Hpgds基因的慢病毒載體；

將所述表達Hpgds基因的慢病毒載體感染脂肪干細胞；

獲得表達Hpgds基因的重組脂肪干細胞。

在一個實施方案中，所述方法還包括提取脂肪干細胞的步驟，提取脂肪干細胞采用膠原酶消化法；優(yōu)選地，膠原酶消化的溫度為36-33℃；消化時間為1-1.5小時。

在一個實施方案中，提取脂肪干細胞步驟之后還包括對提取獲得的脂肪干細胞進行鑒定，優(yōu)選的包括成骨和成脂的鑒定。

在一個實施方案中，所述表達Hpgds基因的慢病毒載體感染的感染復數(shù)值為300-400。

本發(fā)明還提供了重組脂肪干細胞在制備用于修復生物組織的藥物中的應用。

在一個實施方案中，所述生物組織為糖尿病創(chuàng)面組織。

本發(fā)明還提供了一種修復糖尿病創(chuàng)面組織的藥物的制備方法，包括以下步驟：

a.構建過表達Hpgds基因的重組脂肪干細胞；

b.將所述重組脂肪干細胞與水凝膠支架優(yōu)選無動物源性RGD肽修飾多糖三維立體支架混合，得到修復糖尿病創(chuàng)面組織的藥物。

本發(fā)明的有益效果：