[發明專利]一種利用原代肝細胞篩選甲狀腺素受體激動劑的方法

在審

• 申請號: 202010557348.6
• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN111621546A
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 徐劍鋒
• 申請（專利權）人: 上海誠益生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/66
• 分類號: C12Q1/66;C12N15/12;C12N15/65;C12N15/861;C12N7/01
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所(普通合伙) 31251
• 代理人: 郭桂峰

1.一種利用原代肝細胞篩選甲狀腺素受體激動劑的方法，該方法為：

步驟1，構建帶有報告基因和甲狀腺激素反應元件的載體質粒TRE-RG；

步驟2，所述載體質粒TRE-RG用腺病毒組裝成TRE-luc重組腺病毒，再將得到的重組腺病毒感染原代肝細胞，加入待測化合物，根據報告基因表達產物的相關信號來確定待測化合物是否為甲狀腺素受體激動劑以及其激動活性強弱。

2.如權利要求1所述的利用原代肝細胞篩選甲狀腺素受體激動劑的方法，其特征在于：所述報告基因為熒光素酶報告基因，或者綠色熒光蛋白基因。

3.如權利要求1所述的利用原代肝細胞篩選甲狀腺素受體激動劑的方法，其特征在于：所述甲狀腺激素反應元件的序列如SEQ ID NO.1所示。

4.如權利要求1所述的利用原代肝細胞篩選甲狀腺素受體激動劑的方法，其特征在于，所述甲狀腺激素反應元件的序列可采用如下任一序列或者以下任一序列1～10次的重復和組合：

(1)同向重復序列:5-AGGTCANNNNAGGTCA-3；

(2)回文序列:5-AGGTCATGACCT-3；

(3)反向回文序列:5-TGACCTNNNNNNAGGTCA-3；

所述序列中的N表示A、T、G、C其中任意一種。

5.如權利要求1所述的利用原代肝細胞篩選甲狀腺素受體激動劑的方法，其特征在于，TRE-luc重組腺病毒的組裝方法為：將載體質粒TRE-RG與病毒骨架質粒共轉入293系列細胞進行組裝獲得TRE-luc重組轉染病毒。

6.如權利要求1所述的利用原代肝細胞篩選甲狀腺素受體激動劑的方法，其特征在于：所述293系列細胞為293細胞、HEK293A細胞、HEK293T細胞，以及其他用于包裝腺病毒，慢病毒，或腺相關病毒的細胞系。

7.如權利要求1所述的利用原代肝細胞篩選甲狀腺素受體激動劑的方法，其特征在于：所述重組轉染病毒為重組腺病毒、重組慢病毒，或重組腺相關病毒。

8.如權利要求1所述的利用原代肝細胞篩選甲狀腺素受體激動劑的方法，其特征在于：所述原代肝細胞為大鼠原代肝細胞、小鼠原代肝細胞、人原代肝細胞、豚鼠原代肝細胞、狗原代肝細胞、豬原代肝細胞、兔原代肝細胞或猴子原代肝細胞。