[發(fā)明專利]微流控過濾芯片、基于AuNPs的核酸三重檢測試劑盒和方法

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• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN113005002A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓琳;高亞坤;張宇
• 申請（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12M1/36;C12M1/34;C12M1/12;B01L3/00
• 代理公司: 青島華慧澤專利代理事務(wù)所(普通合伙) 37247
• 代理人: 馬千會

1.一種微流控過濾芯片，其特征在于：該芯片從上到下依次包括加樣層、過濾層、檢測層；其中，所述加樣層上設(shè)有第一微腔；所述過濾層上與所述第一微腔對應(yīng)的位置設(shè)有過濾膜；所述檢測層上與所述過濾膜對應(yīng)的位置設(shè)有第二微腔；進入所述第一微腔中的混合物在驅(qū)動力的作用下經(jīng)過所述過濾膜進入所述第二微腔中，實現(xiàn)固液分離。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微流控過濾芯片，其特征在于：所述的過濾膜為納米孔徑的過濾膜。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微流控過濾芯片，其特征在于：所述的檢測層上設(shè)有第三微腔，所述第三微腔通過微流道與所述第二微腔連接。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的微流控過濾芯片，其特征在于：所述的加樣層上方設(shè)有抽吸層，所述抽吸層與所述第三微腔連接，用于傳遞負(fù)壓抽吸力。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的微流控過濾芯片，其特征在于：所述的檢測層下方設(shè)有多聚賴氨酸襯底。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的微流控過濾芯片，其特征在于：所述檢測層和過濾層之間設(shè)置有閥門控制層，用于控制所述第二微腔與第三微腔之間微流道的通斷。

7.一種基于AuNPs的核酸三重檢測試劑盒，其特征在于：該試劑盒包括權(quán)利要求5所述的微流控過濾芯片。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的基于AuNPs的核酸三重檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括修飾有熒光基團的核酸探針、AuNPs溶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的基于AuNPs的核酸三重檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括核酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

10.一種基于AuNPs的核酸三重檢測方法，其特征在于，包括：

（1）將核酸探針溶液添加到AuNPs溶液中，并在室溫下孵育20-40分鐘；

（2）將梯度濃度的核酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液添加到步驟（1）的混合溶液中，并在室溫下孵育20-30分鐘；

（3）添加5X SSC以達(dá)到AuNP的聚集，并將混合物孵育5-15分鐘；

（4）測定步驟（3）孵育后溶液的吸光度；

（5）測完吸光度之后的溶液倒進微流控過濾芯片中，進行固液分離，分離之后的固相AuNPs被留在濾膜表面；液相被吸附在多聚賴氨酸襯底表面；

（6）對固相AuNPs上附著的核酸探針進行拉曼檢測，對多聚賴氨酸襯底上的液相進行熒光檢測；

（7）根據(jù)測得的吸光度、熒光值、拉曼值，采用雙對數(shù)坐標(biāo)，以核酸濃度為橫坐標(biāo)，熒光強度為縱坐標(biāo)，根據(jù)柱狀圖做直線擬合，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線；

（8）測定待測核酸的熒光值，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線，判斷其是否表達(dá)異常。