[發明專利]用于β-地中海貧血基因突變多重實時熒光PCR檢測的引物和探針組合及試劑盒

有效

• 申請號: 202010552797.1
• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN111593115B
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發明（設計）人: 魏劭;雷彩霞;林培蕊;魏超
• 申請（專利權）人: 廈門安普利生物工程有限公司;南京安浦精準醫學檢驗有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 董大媛

本發明提供了用于β?地中海貧血基因突變多重實時熒光PCR檢測的引物和探針組合及試劑盒，屬于分子生物學檢測技術領域；所述引物和探針組合包括第1組引物和探針組合～第12組引物和探針組合中的一組或幾組；每組引物和探針組合中包括用于檢測兩種β?地中海貧血基因突變型和對應的兩種野生型的引物和探針；突變型情況由FAM熒光通道或HEX熒光通道指示，野生型由ROX熒光通道或CY5熒光通道指示；本發明的引物和探針組合能夠對β?地中海貧血突變基因的突變型與野生型中兩個或多個位點同時進行檢測，并通過四個不同的熒光通道讀取信息讀取檢測結果，實現β?地中海貧血的高通量、特異性檢測。

技術領域

本發明涉及分子生物學檢測技術領域，尤其涉及用于β-地中海貧血基因突變多重實時熒光PCR檢測的引物和探針組合及試劑盒。

背景技術

β-地中海貧血是由于β株蛋白基因的缺失或缺陷使β株蛋白鏈的合成受到抑制而引起的溶血性貧血，主要的突變方式為點突變，少數為缺失突變。完全不能合成β鏈稱β0地貧，能夠部分合成β鏈稱β+地貧，可以通過不同的組合形成：β0地貧純合子(β0/β0)、β0地貧雙重雜合子(β0/β+)、β0雜合子(β0/βA)、β+地貧純合子(β+/β+)和β+地貧雜合子(β+/βA)。其中重型β-地中海貧血的患者為β+地貧純合子、β0地貧純合子、β0地貧雙重雜合子這些患者的β鏈幾乎不能合成，引起溶血性貧血；中間型地貧的患者通常是某些β地貧變異型的純合子，如β+地貧純合子；輕型地貧是β0或β+地貧的雜合子狀態，β鏈的合成僅輕度減少，故其病理生理改變極輕微。

β-地中海貧血是一組遺傳性疾病，其臨床表現多樣，由輕到重，可以從正常到反復輸血，甚至危及生命，導致患者在未成年即夭折甚至胎死腹中，給家庭和社會帶來巨大的負擔。且目前尚無根治手段，國內外都沒有療效標準。因此控制和降低β-地中海貧血患兒的出生率才能有效地監控該病的發生，通過人群篩查和遺傳咨詢，對有攜帶β地貧基因的孕齡夫婦所孕胎兒實施產前診斷，是目前最有效的控制重癥β-地中海貧血患兒出生的方法。

DNA直接測序法是進行β-地中海貧血基因突變檢測最直接最準確的方法，是檢測未知的地貧突變基因的關鍵方法。但其需要對樣品進行擴增、純化、序列分析，所需的時間長，成本高，對取材和技術的要求都比較高。因此在臨床應用上具有一定的限制。

反向點雜交法(RDB)是β-地中海貧血基因突變目前國內外最常用的技術，其優點在于一張雜交膜上可同時篩查多種點突變，從而改變了傳統雜交法一次只能檢測一種突變的方式。對于目前國內外的β-地中海基因突變的篩查試劑也大多使用該方法。但是該方法過程復雜，耗時長，容易污染出現假陽性，并且靈敏度較低，出現漏檢現象。

實時熒光PCR技術是近幾年發展起來的一種新技術，該技術在常規的PCR基礎上加入了熒光標記探針或相應的熒光染料來實現定量或定性的功能。它擺脫了凝膠電泳技術，避免了有毒操作，操作簡便。當前也有部分研究選擇使用實時熒光PCR技術用于β-地中海貧血基因突變的檢測，但都是單管檢測一個位點，無法單管檢測多個位點，無法進行高通量檢測。

發明內容

本發明的目的在于提供用于β-地中海貧血基因突變多重實時熒光PCR檢測的引物和探針組合及試劑盒，本發明的引物和探針及試劑盒能夠實現對β-地中海貧血基因突變進行檢測，實現高通量檢測。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了用于β-地中海貧血基因突變多重實時熒光PCR檢測的引物和探針組合，包括第1組引物和探針組合～第12組引物和探針組合中的一組或幾組，每個組合中，引物和探針組合單獨包裝；