[發明專利]用于β-地中海貧血基因突變多重實時熒光PCR檢測的引物和探針組合及試劑盒

有效

• 申請號: 202010552797.1
• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN111593115B
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發明（設計）人: 魏劭;雷彩霞;林培蕊;魏超
• 申請（專利權）人: 廈門安普利生物工程有限公司;南京安浦精準醫學檢驗有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 董大媛

1.用于β-地中海貧血基因突變多重實時熒光PCR檢測的試劑盒，其特征在于，包括引物和探針組合，所述引物和探針組合由第1組引物和探針組合、第3組引物和探針組合、第8組引物和探針組合、第10組引物和探針組合和第12組引物和探針組合中的一組或幾組組成，每個組合中，引物和探針組合單獨包裝；

第1組引物和探針組合包括：41-42M上游引物、41-42M下游引物、41-42M探針、41-42W探針、IVS-Ⅱ-5M上游引物、IVS-Ⅱ-5M下游引物、IVS-Ⅱ-5M探針和IVS-Ⅱ-5W探針；所述41-42M上游引物、41-42M下游引物、41-42M探針和41-42W探針的核苷酸序列分別如SEQ?IDNO.1~SEQ?ID?NO.4所示；所述IVS-Ⅱ-5M上游引物、IVS-Ⅱ-5M下游引物、IVS-Ⅱ-5M探針和IVS-Ⅱ-5W探針的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.93~SEQ?ID?NO.96所示；

第3組引物和探針組合包括：26M上游引物、26M下游引物、26M探針、26W探針、30M上游引物、30M下游引物、30M探針和30W探針；所述26M上游引物、26M下游引物、26M探針和26W探針的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.25~SEQ?ID?NO.28所示；所述30M上游引物、30M下游引物、30M探針和30W探針的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.85~SEQ?ID?NO.88所示；

第8組引物和探針組合包括：14-15M上游引物、14-15M下游引物、14-15M探針、14-15W探針、41M上游引物、41M下游引物、41M探針和41W探針；所述14-15M上游引物、14-15M下游引物、14-15M探針、14-15W探針的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.53~SEQ?ID?NO.56所示；所述41M上游引物、41M下游引物、41M探針和41W探針的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.89~SEQ?IDNO.92所示；

第10組引物和探針組合包括：-31M上游引物、-31M下游引物、-31M探針、-31W探針、CAP40-43M上游引物、CAP40-43M下游引物、CAP40-43M探針和CAP40-43W探針；所述-31M上游引物、-31M下游引物、-31M探針和-31W探針的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.77~SEQ?IDNO.80所示；所述CAP40-43M上游引物、CAP40-43M下游引物、CAP40-43M探針和CAP40-43W探針的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.81~SEQ?ID?NO.84所示；

第12組引物和探針組合包括：CAP-1M上游引物、CAP-1M下游引物、CAP-1M探針、CAP-1W探針、-30M上游引物、-30M下游引物、-30M探針和-30W探針；所述CAP-1M上游引物、CAP-1M下游引物、CAP-1M探針和CAP-1W探針的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.57~SEQ?ID?NO.60所示；所述-30M上游引物、-30M下游引物、-30M探針和-30W探針的核苷酸序列分別如SEQ?IDNO.49~SEQ?ID?NO.52所示；

所述41-42M探針、26M探針、14-15M探針、CAP-1M探針、IVS-1-5M探針和-31M探針的5’端分別標記有熒光報告基團FAM，3’端分別標記有淬滅基因BHQ1；

所述-30M探針、CAP40-43M探針、30M探針、41M探針和IVS-Ⅱ-5M探針的5’端分別標記有熒光報告基團HEX，3’端分別標記有淬滅基因BHQ1；

所述41-42W探針、26W探針、14-15W探針、CAP-1W探針、IVS-1-5W探針和-31W探針的5’端分別標記有熒光報告基團ROX，3’端分別標記有淬滅基因BHQ2；

所述-30W探針、CAP40-43W探針、30W探針、41W探針和IVS-Ⅱ-5W探針的5’端分別標記有熒光報告基團CY5，3’端分別標記有淬滅基因BHQ2；

所述第1組引物和探針組合、第3組引物和探針組合、第8組引物和探針組合、第10組引物和探針組合和第12組引物和探針組合還分別和TE緩沖液混合，對應得到第1擴增液、第3擴增液、第8擴增液、第10擴增液和第12擴增液；

第1擴增液:50μM的41-42M上游引物6μL，50μM的IVS-Ⅱ-5M上游引物6μL，50μM的41-42M下游引物6μL，50μM的IVS-Ⅱ-5M下游引物6μL，50μM的41-42M探針0.9μL，50μM的41-42W探針0.9μL，50μM的IVS-Ⅱ-5M探針0.9μL，50μM的IVS-Ⅱ-5W探針0.9μL，TE緩沖液2.4μL；

第3擴增液:50μM的26M上游引物6μL，50μM的30M上游引物6μL，50μM的26M下游引物6μL，50μM的30M下游引物6μL，50μM的26M探針0.9μL，50μM的26W探針0.9μL，50μM的30M探針0.9μL，50μM的30W探針0.9μL，TE緩沖液2.4μL；

第8擴增液:50μM的14-15M上游引物6μL，50μM的41M上游引物6μL，50μM的14-15M下游引物6μL，50μM的41M下游引物6μL，50μM的14-15M探針0.9μL，50μM的14-15W探針0.9μL，50μM的41M探針0.9μL，50μM的41W探針0.36μL，TE緩沖液2.94μL；

第10擴增液:50μM的-31M上游引物6μL，50μM的CAP40-43M上游引物6μL，50μM的-31M下游引物6μL，50μM的CAP40-43M下游引物6μL，50μM的-31M探針0.9μL，50μM的-31W探針0.9μL，50μM的CAP40-43M探針0.9μL，50μM的CAP40-43W探針0.78μL，TE緩沖液2.52μL；

第12擴增液:50μM的CAP-1M上游引物6μL，50μM的-30M上游引物6μL，50μM的CAP-1M下游引物6μL，50μM的-30M下游引物6μL，50μM的CAP-1M探針0.9μL，50μM的CAP-1W探針0.9μL，50μM的-30M探針0.9μL，50μM的-30W探針0.78μL，TE緩沖液2.57μL。