[發明專利]一種用于抗體檢測的雙層微流控芯片及其制備方法

在審

• 申請號: 202010552669.7
• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN113009143A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 韓琳;王春華;張宇;劉宏
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/53;B01L3/00
• 代理公司: 青島華慧澤專利代理事務所(普通合伙) 37247
• 代理人: 劉娜

本發明公開了一種用于抗體檢測的雙層微流控芯片及其制備方法，該芯片從下到上依次包括反應層襯底、微腔加樣層和封蓋層，所述反應層襯底包括載玻片基板和組裝于載玻片基板上的戊二醛基底，所述戊二醛基底上印刷有條形檢測帶和質控帶；所述微腔加樣層上設有多個上下貫通的通孔，多個所述通孔與多個所述條形檢測帶和質控帶一一對應形成多個反應池；所述封蓋層底部設有多個微流道凹槽，多個所述微流道凹槽與多個反應池一一對應，所述微流道凹槽的兩端分別設有上下貫通所述封蓋層的流入孔和流出孔。本發明所公開的芯片可以實現對血小板抗體的快速、靈敏，準確的高通量檢測。

技術領域

本發明涉及微流控芯片技術領域，特別涉及一種用于抗體檢測的雙層微流控芯片及其制備方法。

背景技術

隨著腫瘤、血液系統疾病患者的顯著增加及臨床輸血醫學的快速發展，輸血用量逐年攀升。輸血作為提升血小板計數，防止出血，保障患者生命安全的有效措施，其安全、科學、有效的輸注已成為臨床輸血技術發展的必然要求。然而，目前大多數輸血仍然采用隨機輸注，不相合的血液輸入患者體內后迅速被機體免疫系統破壞清除，導致血小板輸注無效癥頻繁發生，不僅浪費了寶貴的血液資源，而且延誤了患者的最佳治療時機，還增加了患者痛苦和經濟負擔。

為改善這一現狀，提高患者輸血效果，部分臨床醫院新增開展了抗體檢測項目。目前已存在的血型檢測技術有：免疫熒光試驗、酶聯免疫吸附試驗；混合被動血凝技術、混合細胞粘附試驗(固相技術)、特異的單克隆抗體對抗原固定試驗等，但這些試驗的操作程序都比較復雜，需要時間長，有的所需設備儀器昂貴，所以血型配型到目前還沒有成為臨床輸血的常規檢測項目，部分項目在臨床開展過程中因準確性和靈敏度達不到安全輸血要求，操作過于繁瑣，逐漸被臨床淘汰。目前臨床常用的固相紅細胞吸附試驗技術(solid-phasered cell adherence,SPRCA)和單克隆特異的抗原固定試驗(monoclonal antibody-specific immobilization of platelet antigens assay,MAIPA)，SPRCA技術原理為在反應板中包被抗血液單克隆抗體，血液懸液經離心洗滌后可在反應孔底部形成血液單層。加入血清或血漿，在孔中經過孵育后，若該血清或血漿中含有抗體，則該抗體與反應孔中的血液單層結合，未結合的成分通過洗滌被去除。加入抗人IgG及人IgG致敏紅細胞(指示紅細胞)，經離心后指示紅細胞通過抗人IgG的橋連與血液單層上的抗體結合，因此陽性反應為指示紅細胞平鋪在反應孔底部表面。而陰性反應為指示紅細胞在離心力的作用下聚集于反應孔底部中央；MAIPA技術原理為血小板先結合人的同種抗體，然后與不同的抗血液膜糖蛋白的(抗GPIb/CD42b、GPIIb/CD41a、GPIIIa、GPIX、HLA等)鼠抗人單克隆抗體孵育。經洗滌后裂解血液，將產物移至包被的羊抗鼠IgG微孔板內，通過辣根過氧化物酶標記羊抗人IgG，經酶底物顯色可以檢測膜糖蛋白特異的同種抗體。

以上方法進行抗體定性檢測時，其靈敏度和特異性僅有30％-40％，結果判讀存在人為誤差，約幾個小時才能完成檢測，不能滿足了臨床醫生的快速需求，同時該技術也沒有相應的質控技術為了克服臨床上其他抗體檢測方法靈敏度低，特異性差，臨床操作復雜，檢測時間過長，結果判讀困難、缺乏相應的試劑質控等實際問題；現有微柱凝膠法進行的抗體檢測指示紅細胞一般會采用化學試劑(如戊二醛)將紅細胞醛化處理，然后包被抗人IgG來指示反應結果，該方法不僅技術要求高，操作時間長(需靜置過夜)，且醛化紅細胞破壞抗原結構，容易造成漏檢，因此限制了使用，難以達到臨床快速安全配血要求。

因此，需要建立靈敏，快速，低成本且易于操作的抗體檢測系統。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供了一種用于抗體檢測的雙層微流控芯片及其制備方法，以達到血小板抗體的快速、靈敏，準確的高通量檢測的目的。

為達到上述目的，本發明的技術方案如下：