[發明專利]可視化基于免疫磁珠檢測金黃色葡萄球菌試劑盒

在審

• 申請號: 202010552535.5
• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN112649602A
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 宋秀玲;唐小飛;司曉雪;李娟;徐坤;趙超;王娟;王瓊;胡雯;鄧璐;張加美
• 申請（專利權）人: 吉林大學;吉林省一汽總醫院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/551;G01N21/78;G01N21/33
• 代理公司: 長春市東師專利事務所 22202
• 代理人: 張鐵生;劉瑩

本發明公開了一種用于可視化基于免疫磁珠檢測金黃色葡萄球菌試劑盒，制備羧基化Fe₃O₄納米磁珠，將該磁珠與抗金黃色葡萄球菌雞卵黃抗體IgY偶聯，得到免疫磁珠；取待測液，將其與免疫磁珠混合，于旋轉混合儀上室溫混懸后磁性分離，再加入適量的H₂O₂溶液，磁分離，取剩余的H₂O₂溶液加入50μLHRP溶液和50μLTMB溶液顯色，肉眼觀察溶液顏色變化即可定性。該發明提供的利用免疫磁珠與TMB?HRP?H₂O₂顯色體系結合對金黃色葡萄球菌檢測，快速、可視的檢測金黃色葡萄球菌，縮短了檢測時間，最低檢測濃度為10³ CFU·mL^?1，加標回收率102.26%，靈敏度高，穩定性好，特異性強。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及可視化基于免疫磁珠檢測金黃色葡萄球菌試劑盒。

背景技術

近年來，世界范圍內的惡性食品安全事件頻發，嚴重影響著許多國家的經濟狀況和社會穩定。全球每年發生食源性疾病的人數高達數十億人，其中66%以上是由于食源性病原菌所導致。無論在發達國家還是發展中國家, 由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒（Staphylococcus aureus food poisoning, SFP）在細菌性食物中毒中均占較大比例。

金黃色葡萄球菌是一種常見的食源性致病菌，其本身殺傷性不大，但在食品中大量繁殖之后可產生金黃色葡萄球菌腸毒素。金黃色葡萄球菌腸毒素對腸道破壞性大，常引起金黃色葡萄球菌腸炎，該病起病急，中毒癥狀嚴重，臨床癥狀主要表現為嘔吐、發熱、腹痛、腹瀉和休克等，嚴重可導致循環衰竭。

目前，針對金黃色葡萄菌的實驗室檢測方法，主要有傳統分離培養生化鑒定法、免疫學檢測方法和分子生物學檢測方法。但這些方法存在著操作復雜、耗時長、靈敏性低、特異性差、對實驗條件和操作人員要求較高等缺點。因此，建立一種操作簡單、快速、靈敏且準確的金黃色葡萄球菌的檢測方法對預防和控制由金黃色葡萄球菌引發的食品安全問題十分必要。

發明內容

本發明的目的是提供一種可視化基于免疫磁珠檢測金黃色葡萄球菌試劑盒。

可視化基于免疫磁珠檢測金黃色葡萄球菌試劑盒，它包括：免疫磁珠、溶液顯色劑；所述的免疫磁珠是羧基化Fe₃O₄納米粒子與抗金黃色葡萄球菌雞卵黃抗體IgY偶聯；所述的溶液顯色劑包括：TMB溶液、HRP溶液和H₂O₂溶液；

所述的免疫磁珠濃度為0.5~0.8mg·mL^-1，所述的TMB溶液濃度為1.0~2.5mg·mL^-1、HRP溶液濃度為1.0~10μg·mL^-1；

所述的免疫磁珠濃度為0.6mg·ml^-1，TMB溶液濃度為2.0 mg·mL^-1，HRP溶液濃度為2.5μg·mL^-1；

所述的H₂O₂溶液用量為50μL，TMB溶液用量為50μL，HRP溶液用量為50μL；

所述的羧基化Fe₃O₄納米粒子是用以下方法制備的：

① 將1.08 g FeCl₃?6H₂O 和 20 mL 乙二醇加入燒杯，超聲溶解 10 min；

② 向①加入1.2 g 醋酸鈉和0.2 g 檸檬酸三鈉，超聲溶解 10 min；

③ 向②加入0.2 g PEG-6000，超聲至完全溶解；

④ 將上述溶液③轉移反應釜中198℃反應 18 h ，反應釜冷卻至室溫后轉移其中磁珠溶液至小燒杯中，用水和無水乙醇交替清洗磁珠三遍，得到羧基化Fe₃O₄納米粒子；