[發明專利]可視化基于免疫磁珠檢測金黃色葡萄球菌試劑盒

在審

• 申請號: 202010552535.5
• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN112649602A
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 宋秀玲;唐小飛;司曉雪;李娟;徐坤;趙超;王娟;王瓊;胡雯;鄧璐;張加美
• 申請（專利權）人: 吉林大學;吉林省一汽總醫院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/551;G01N21/78;G01N21/33
• 代理公司: 長春市東師專利事務所 22202
• 代理人: 張鐵生;劉瑩

1.可視化基于免疫磁珠檢測金黃色葡萄球菌試劑盒，它包括：免疫磁珠、溶液顯色劑；所述的免疫磁珠為羧基化Fe₃O₄納米粒子與抗金黃色葡萄球菌雞卵黃抗體IgY偶聯；所述的溶液顯色劑包括：TMB溶液、HRP溶液和H₂O₂溶液。

2. 根據權利要求1所述的可視化基于免疫磁珠檢測金黃色葡萄球菌試劑盒，其特征在于：所述的免疫磁珠濃度為0.5~0.8mg·mL^-1， TMB溶液濃度為1.0~2.5mg·mL^-1，HRP溶液濃度為1.0~10μg·mL^-1。

3. 根據權利要求2所述的可視化基于免疫磁珠檢測金黃色葡萄球菌試劑盒，其特征在于：所述的免疫磁珠濃度為0.6mg·ml^-1，TMB溶液濃度為2.0 mg·mL^-1，HRP溶液濃度為2.5μg·mL^-1。

4.根據權利要求1、2或3所述的可視化基于免疫磁珠檢測金黃色葡萄球菌試劑盒，其特征在于：所述的H₂O₂溶液用量為50μL，TMB溶液用量為50μL，HRP溶液用量為50μL。

5.根據權利要求4所述的可視化基于免疫磁珠檢測金黃色葡萄球菌試劑盒，其特征在于：所述的羧基化Fe₃O₄納米粒子是用以下方法制備的：

1）將1.08 g FeCl₃?6H₂O 和 20 mL 乙二醇加入燒杯，超聲溶解 10 min；

2） 向1）加入1.2 g 醋酸鈉和0.2 g 檸檬酸三鈉，超聲溶解 10 min；

3） 向2）加入0.2 g PEG-6000，超聲至完全溶解；

4） 將上述溶液3）轉移反應釜中198℃反應 18 h ，反應釜冷卻至室溫后轉移其中磁珠溶液至小燒杯中，用水和無水乙醇交替清洗磁珠三遍，得到羧基化Fe₃O₄納米粒子。

6.根據權利要求5所述的可視化基于免疫磁珠檢測金黃色葡萄球菌試劑盒，其特征在于：所述的免疫磁珠是用以下方法制備的：

1） 取5mg羧基化Fe₃O₄納米粒子，加入1mLPBS，超聲重懸1~2min，磁性分離，所得磁珠用PBS洗滌2遍后，加入1mL PBS重懸；

2） 向1）中加入10mg EDC·HCl和5mg NHS，混懸30min后磁性分離，PBS洗3遍，加入1mLPBS重懸；

3） 向2）加入500μg抗金黃色葡萄球菌雞卵黃抗體IgY，室溫混懸2h后磁性分離，所得磁珠用PBS洗3次；

4） 加入1mL封閉液封閉1h，得到功能化免疫磁珠。

7.可視化檢測食品中金黃色葡萄球菌的方法，它包括：

1） 取待測樣品液100μL 加入上述免疫磁珠，反應體系1mL，室溫混懸富集30~75min，磁分離，去上清，用PBS清洗；

2）加入H₂O₂溶液，分解反應1~4min，磁分離，取上清液；

3） 向2）中的上清液加入pH為4.0~6.0的顯色液，所述的顯色液包括：上述HRP溶液和TMB溶液，避光反應5min，肉眼觀察顏色或采用紫外分光光度計測吸收光。

8.根據權利要求7所述的可視化檢測食品中金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于：所述的富集時間為60min，H₂O₂分解反應時間為2min，顯色液pH為4.5。