[發(fā)明專利]一種新型冠狀病毒Mpro

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010552272.8
• 申請(qǐng)日: 2020-06-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111896504A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-11-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李冰清;岳盈盈;宋楠楠;馬玥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64;C12Q1/37
• 代理公司: 北京德崇智捷知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11467
• 代理人: 申星宇

本發(fā)明公開(kāi)了一種新型冠狀病毒Mpro蛋白酶靶點(diǎn)藥物篩選試劑盒及其應(yīng)用，包括M^pro蛋白、熒光多肽底物以及反應(yīng)試劑緩沖液，多肽底物兩端分別含有酶解熒光標(biāo)記，所述多肽底物的序列為SEQ ID NO:1所示的多肽底物。本發(fā)明開(kāi)發(fā)出試劑盒可以快速篩選出可能是M^pro蛋白酶的靶標(biāo)化合物的藥物，并且可通過(guò)計(jì)算M^pro的米氏常數(shù)Km值及催化效率Kcat值，定量判定靶標(biāo)化合物的抑制能力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物化學(xué)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，是涉及一種新型冠狀病毒M^pro蛋白酶靶點(diǎn)藥物篩選試劑盒及應(yīng)用。

背景技術(shù)

人感染了COVID-19病毒后多會(huì)出現(xiàn)有呼吸道癥狀、發(fā)熱、咳嗽、氣促和呼吸困難等癥狀。嚴(yán)重者會(huì)發(fā)生肺炎、嚴(yán)重急性呼吸綜合征、腎衰竭，甚至死亡。

COVID-19疫苗的研制還在研制過(guò)程中，篩選靶向COVID-19病毒的藥物對(duì)于疾病的治療至關(guān)重要。在中草藥、海洋生物、陸地微生物及產(chǎn)物等自然界中萃取、尋找抗COVID-19病毒藥物將為是新結(jié)構(gòu)、新機(jī)制抗COVID-19病毒藥物提供重要來(lái)源，對(duì)于抗COVID-19病毒藥物的研究具有重要意義。但COVID-19病毒致病性和傳染性非常強(qiáng)，相關(guān)病毒培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)僅能在生物安全等級(jí)三級(jí)以上實(shí)驗(yàn)室才可進(jìn)行，嚴(yán)重制約了藥物篩選的速度和效率。

COVID-19的生存和復(fù)制依賴于其主蛋白酶(Mpro)活性，因此抑制Mpro酶活的藥物有很大幾率對(duì)COVID-19病毒感染具有治療效果因此需要一種能有效解決上述問(wèn)題的新型冠狀病毒Mpro蛋白酶靶點(diǎn)藥物篩選試劑盒及應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種新型冠狀病毒Mpro蛋白酶靶點(diǎn)藥物篩選試劑盒及應(yīng)用.

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明包括以下步驟：

本發(fā)明包括M^pro蛋白、熒光多肽底物以及反應(yīng)試劑緩沖液，多肽底物兩端分別含有酶解熒光標(biāo)記，所述多肽底物的序列為SEQ ID NO:1所示的多肽底物；。

進(jìn)一步地，所述多肽底物的N端連接標(biāo)記基團(tuán)，C端連接熒光淬滅基團(tuán)。

進(jìn)一步地，所述酶解熒光標(biāo)記的標(biāo)記基團(tuán)和熒光淬滅基團(tuán)可以為Dabcyl和Edans、Mca和lys(dnp)、Abz和Tyr(3-NO2)、6－TMARA和FITC中的一種。進(jìn)一步地，所述試劑盒的酶活反應(yīng)20μl反應(yīng)體系如下：

M^pro蛋白2μl

多肽底物5μl

反應(yīng)buffer 13μl

一種新型冠狀病毒Mpro蛋白酶靶點(diǎn)藥物篩選試劑盒在篩選靶點(diǎn)藥物檢測(cè)其抑制活性的應(yīng)用。

一種靶點(diǎn)藥物篩選酶活測(cè)定定量分析的方法，M^pro蛋白通過(guò)酶活反應(yīng)水解所述多肽底物使得所述多肽底物的酶解熒光標(biāo)記的基團(tuán)分離后在336nm波長(zhǎng)光激發(fā)后檢測(cè)顯色。

進(jìn)一步地，通過(guò)計(jì)算M^pro的米氏常數(shù)Km值及催化效率Kcat值，定量判定靶標(biāo)化合物的抑制能力。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明開(kāi)發(fā)出試劑盒可以快速篩選出可能是M^pro蛋白酶的靶標(biāo)化合物的藥物，并且可通過(guò)計(jì)算M^pro的米氏常數(shù)Km值及催化效率Kcat值，定量判定靶標(biāo)化合物的抑制能力。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例子中的蛋白酶抑制劑M5對(duì)M^pro蛋白降解底物TE peptide的酶活抑制曲線結(jié)果圖；