[發明專利]一種檢測蛋白含量的氨基黑染色液、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202010551793.1
• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN111537316A
• 公開（公告）日: 2020-08-14
• 發明（設計）人: 陳洪棟
• 申請（專利權）人: 陜西健吉躍生物科技有限公司
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N1/34;G01N21/78;G01N1/44;G01N1/28;G01N1/38;G01N21/31
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本發明適用于蛋白定量技術領域，提供了一種檢測蛋白含量的氨基黑染色液、試劑盒及方法，該試劑盒包括氨基黑染色液、漂洗液、洗脫液以及若干組不同濃度的標準蛋白溶液；其中，氨基黑染色液包括甲醇、冰醋酸、氨基黑和水。本發明提供的含有氨基黑染色液的試劑盒，充分利用蛋白質中氨基酸的氨基和羧基在適當的酸堿環境中可以反應，使得蛋白質帶正電荷，而氨基黑是以負離子形式出現，在正負電荷的相互作用下，使蛋白質的表面有大量的染料分子沉積，從而使蛋白痕跡呈染料顏色顯出，進而可以提供一種操作簡單，靈敏度高，準確性好的蛋白定量方法。

技術領域

本發明屬于蛋白定量技術領域，尤其涉及一種檢測蛋白含量的氨基黑染色液、試劑盒及方法。

背景技術

蛋白定量結果是生物醫學研究中的基礎數據。其準確與否關系到研究結果的可靠程度。蛋白定量是我們在做許多生物醫學實驗前需要做的前提工作，尤其在做蛋白免疫印跡Western Blot時，只有將待測樣品中蛋白含量確定，才能明確我們的上樣量，方能為進一步的實驗打下基礎。

樣品總蛋白定量技術方法由于限制條件較多,操作復雜,適用面較窄，目前，實驗中測定蛋白含量的方法有：Lowry法，BCA法，Bradford法，磺基水楊酸沉淀法等。其測定原理為：Lowry法的測定原理為蛋白質與堿性硫酸銅作用形成銅-肽鍵絡合物，后者與色氨酸和酪氨酸共同作用使酚試劑中的磷鉬酸和磷鎢酸還原生成藍色化合物；BCA法的測定原理為蛋白質價銅離子還原成亞銅離子，后者在堿性溶液中與BCA結合生成紫紅色絡合物。Lowry法與BCA法同屬于化學法。磺基水楊酸沉淀法屬于物理法，Bradford法屬于染料結合法，即考馬斯亮藍G-250在酸性溶液中呈紅棕色，與蛋白質結合后轉變為藍色，顏色深淺與蛋白濃度呈正比關系。

但是對應的這些方法存在著一些缺陷，如影響Lowry法測定蛋白的主要因素有某些氨基酸、NH⁺⁴、兼性離子緩沖液、非離子表面活性劑、蔗糖、含硫化合物；影響BCA法測蛋白的主要因素有蔗糖、 NH⁺⁴、尿素、EDTA，磺基水楊酸沉淀法雖然克服了以上各種因素，但是不同的蛋白所形成的沉淀性質差別很大。因此用此法測定蛋白含量時應選相同的或性質相近的蛋白做標準。影響Bradford法的主要因素有甘油、乙酸、去污劑和一些堿性緩沖系統。在實驗中較為常用的為BCA法，包涵體的變性液和復性液中經常會含有尿素和β-巰基乙醇，這些物質會干擾BCA法的測定，所以BCA法不適于含有尿素和β-巰基乙醇的變性液中蛋白含量的測定。而在蛋白免疫印跡實驗中需要加入Loading Buffer，其中含有β-巰基乙醇，因此用BCA法的測量不夠準確。

因此，目前亟待尋找一種能夠更加準確的測定樣品中蛋白含量的方法，以規避上述所容易產生的實驗誤差。

發明內容

本發明實施例的目的在于提供一種檢測蛋白含量的氨基黑染色液，旨在解決背景技術中提出的問題。

本發明實施例是這樣實現的，一種檢測蛋白含量的氨基黑染色液，每升所述氨基黑染色液包括以下組分：甲醇200~400mL、冰醋酸50~150mL、氨基黑0.05~0.15g，余量為水。

作為本發明實施例的一種優選方案，每升所述氨基黑染色液包括以下組分：甲醇250~350mL、冰醋酸80~120mL、氨基黑0.08~0.12g，余量為水。

本發明實施例的另一目的在于提供一種檢測蛋白含量的試劑盒，其包括上述的氨基黑染色液。

作為本發明實施例的另一種優選方案，所述試劑盒還包括漂洗液、洗脫液以及若干組不同濃度的標準蛋白溶液。

作為本發明實施例的另一種優選方案，所述標準蛋白溶液為標準牛血清白蛋白溶液。

作為本發明實施例的另一種優選方案，所述漂洗液為甲醇水溶液，其體積濃度為40%~60%。