[發明專利]一種人源iPS分化的心肌細胞用的新型3D培養基及其配制方法和應用在審
| 申請號： | 202010551026.0 | 申請日： | 2020-06-17 |
| 公開（公告）號： | CN111690596A | 公開（公告）日： | 2020-09-22 |
| 發明（設計）人： | 林彬;高強;岑堅正;莊建;林澤斌;林先明;周麗詩 | 申請（專利權）人： | 廣東源心再生醫學有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/077 | 分類號： | C12N5/077;C12N5/071 |
| 代理公司： | 佛山幫專知識產權代理事務所(普通合伙) 44387 | 代理人： | 曾鳳云 |
| 地址： | 528000 廣東省佛山市南海區獅山鎮321國*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 ips 分化 心肌 細胞 新型 培養基 及其 配制 方法 應用 | ||
1.一種人源iPS分化的心肌細胞用的新型3D培養基，其特征在于，每300μL的培養基中包括纖維蛋白原90-150μL、抑肽酶15-25μL、基質膠60-100μL、凝血酶10μL、殼聚糖濃度為1-3％，余量為心肌細胞培養液；
其中，所述心肌細胞培養液是由RPMI 1640培養液加入終體積濃度為3％的KnockOutTM血清替代物配制而成。
2.根據權利要求1所述的新型3D培養基，其特征在于，每300μL新型3D培養基中包括纖維蛋白原120μL、抑肽酶20μL、基質膠80μL、凝血酶10μL、殼聚糖濃度為2.0％。
3.根據權利要求1所述的新型3D培養基，其特征在于，所述纖維蛋白原的工作濃度為50-100mg/ml，用PBS緩沖液配制而成。
4.根據權利要求1所述的新型3D培養基，其特征在于，所述抑肽酶的工作濃度為50-100mg/ml，用PBS緩沖液配制而成。
5.根據權利要求1所述的新型3D培養基，其特征在于，所述凝血酶的工作濃度為1000U/ml，用PBS緩沖液配制而成。
6.根據權利要求1-5任一項所述的新型3D培養基的配制方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1、將纖維蛋白原用PBS緩沖液配成50-100mg/ml的工作濃度，將抑肽酶用PBS緩沖液配成50-100mg/ml的工作濃度，將凝血酶用PBS緩沖液配成1000U/ml的工作濃度待用；
S2、將纖維蛋白原、抑肽酶和基質膠按體積比6:1:4混合得到纖維蛋白液，在心肌細胞用心肌細胞培養液重懸加入后再加入終濃度為1-3％的殼聚糖得混合液；
S3、將所得的混合液與凝血酶按體積比為29:1的比例混合即得培養基。
7.根據權利要求1-5任一項所述的新型3D培養基在人源iPS分化的心肌細胞培養上的應用。
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，心肌細胞是先用心肌細胞培養液重懸后，在培養基制備階段包裹入由纖維蛋白原、抑肽酶和基質膠混合后的纖維蛋白液中的；所述心肌細胞培養液是由RPMI 1640培養液加入終體積濃度為3％的KnockOutTM血清替代物配制而成。
9.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，心肌細胞的培養條件為37℃，5％CO2培養箱中培養30分鐘。
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